收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

NBS1基因多态性与慢性乙肝病毒感染引起的肝细胞癌的相关性及生物学功能研究

甄亚男  
【摘要】:目的:肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)居我国恶性肿瘤死亡率的第三位,并且呈逐年上升趋势。大部分的肝癌患者在晚期才被确诊出,因此其5年生存率小于10%。目前肝癌的治疗手段主要以手术为主,化疗、放疗为辅,总体预后不良,因此需要寻找一种更加有效的辅助治疗方法,从而提高肝癌的治疗效果。在中国约80%的肝癌患者有乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)感染史,这在很大程度上反映了慢性HBV感染与HCC患病的关系。由病毒性肝炎和肝硬化最终发展为肝癌是肝癌形成的重要过程,然而只有一部分慢性HBV携带者发生肝癌,表明宿主遗传因素也可能参与HCC的发病过程。DNA损伤后,细胞周期检查点的缺失可以作为肝癌发生的标志。有研究结果显示DNA双链断裂可使HBV的整合率明显提高,从而促进HCC的发生发展。NBS1基因作为一种重要的DNA双链修复相关基因,对维持基因组稳定性及防止细胞癌变具有非常关键的作用,在维持端粒稳定、开启免疫球蛋白及减数分裂重组、促进胚胎发育等发面也发挥了重要作用。流行病学资料显示,NBS1缺失的杂合子可能不会出现相关临床症状,但患者发生恶性肿瘤的风险仍有明显增高,尤其是乳腺癌、前列腺癌、直肠癌、白血病及非霍奇金淋巴瘤等,但尚无研究明确证明其与肝癌发生有相关性。NBS1基因突变可促进小鼠肝癌的发生,多个NBS1单核苷酸多态性(single-nucleotidepolymorphism,SNP)位点可以增加患某些癌症的风险。NBS1SNP在HBV相关HCC中无大宗病例报道,基因调控机制的研究也较少。本文在之前报导的基础上,首先做了 NBS1基因多态性与慢性HBV感染引起的HCC的相关性分析,然后运用Meta分析的方法作系统综述,进一步明确阳性位点rs1805794C/G多态性与各种癌症易感性的关系,最后,我们探究基因调控对肝癌细胞功能的影响机制。方法:从我院(山东省医学科学院附属医院)就诊的患者及体检的健康人群中随机选取508例HBV感染相关的HCC患者作为试验组;另外选取481例性别与年龄相匹配的HBV感染患者以及581例未被HBV感染的健康人作为对照组。根据相关选点原则,从先前的全基因组相关研究(GWAS)和NBS1候选基因关联研究中选取若干个SNP位点。收集全血标本提取基因组DNA,并用Taqman法进行基因分型。采用双侧卡方检验评估患者和对照组在年龄、性别、吸烟和饮酒状况分布上的差异,P0.05为统计学显著值。利用Plink软件、Cochran-Armitage趋势测试分析每组的基因型-表型关联。对多个SNP位点测试进行Bonferroni校正,P0.0125被认为有显著关联性。为了进一步明确rs1805794C/G多态位点与癌症易感性的关系,我们运用Meta分析的方法对相关研究作出了系统的综述。研究中检索了 2008年至2018年间在Pubmed及Embase公开发表的关于NBS1 rs1805794与癌症易感性相关的临床研究,对纳入文献进行质量评价。用优势比(OR)和相对应的95%可信区间(95%CI)来评价NBS1rs1805794C/G多态性与癌症的关联性强度。按照种族、对照组来源及癌症种类进行亚组分类,以评价这些因素对关联分析的影响。最后,评估敏感性和发表偏倚。采用不同浓度NBS1-siRNA对HepG2细胞作用不同时间,检测NBS1基因表达水平的变化,并利用CCK-8实验和流式细胞术分析转染前、后细胞的增殖和凋亡水平。最后,利用PI单染色法结合流式细胞分析技术检测细胞周期情况。用中浓度的siRNA转染HepG2细胞抑制NBS1表达,24 h或48 h后提取细胞内总的mRNA,利用FluiDigm高通量基因分析仪对48个特定基因分别进行定量检测,其中β-actin和GAPDH为内参基因,根据|FoldChange|2.0,P0.05的标准筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)。对上述两个时间点共有的差异表达基因进行基因本体论(Gene ontology,GO)分析(P0.05),主要针对GO_BP进行分析。认为P值越小,该条GO Term越有意义,选取排在前10位的GO Term进行分析;对两个时间点共有的差异表达基因通过京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)进行信号通路富集,根据P0.05的标准选取信号通路。结果:我们选取了五个可能导致肝癌的NBS1 SNPs,分别是rs10464867、rs1063053、rs1061302、rs1805794、rs709816。对参与者的全血 DNA 样本进行分析,其中四个位点(rs10464867、rs1063053,rs1805794、rs709816)被成功分型。我们发现这四个位点与HCC或慢性乙型肝炎的发病以及HBV的感染均无显著相关性。值得注意的是,我们发现NBS1rsl805794C/G在HBV感染患者进展成为HCC者中有重要作用(P=2.99E-03,OR=1.31)。经过一系列的筛选,最终有21篇文献(包含25个独立研究)被纳入我们的Meta分析,包括10901例癌症病例及14124例对照。纳入研究的对照组基因分型均符合H-W平衡,文献质量评分为6.5-8.5分。总体而言,携带C等位基因将增加患癌的风险(Cvs.G:OR=1.21,95%CI:1.08-1.36,P=0.001)。亚组分析显示携带C等位基因将增加患肝癌(OR=1.37,95%CI:1.13~1.67,P=0.001)、白血病(OR=1.77,95%CI:1.19~2.63,P=0.005)及鼻咽癌(OR=1.98,95%CI:1.76~2.24,P0.001)的风险。鼻咽癌的所有遗传模型以及肝癌及白血病的大部分遗传模型下,NBS1rs1805794C/G多态性与增加患癌风险存在显著关联性。亚洲人群rs1805794C/G多态性与癌症风险的增加存在显著关联性,而在高加索人群的分析结果表明各基因型均无明显统计学意义;对照组为人群基础(population-based,PB)来源的研究中rs1805794C/G与癌症风险增加存在显著关联性,而医院基础(hospital-based,HB)来源的研究中各基因型均无明显统计学意义。所有遗传模型的总体比较均发现显著异质性(P0.001),故采用随机效应模型。亚组分层分析后,乳腺癌、结直肠癌、肝癌、淋巴瘤、鼻咽癌、高加索人群,PB来源的研究中异质性明显降低,在大部分的基因模型中P0.1。在逐步排除每一项研究时并没有观察到OR值出现统计学上的差异性变化,结果验证了本Meta分析结果的稳定性;Begg' s漏斗图显示纳入的研究在各遗传模型的图形中分布基本对称,呈倒置漏斗形,表明没有发现明显的发表偏倚。转染不同浓度NBS1-siRNA的HepG2细胞与对照组相比,转染后细胞活力明显减弱(P0.05或P0.01)。在转染24小时后,细胞增殖率较未转染的细胞即有所降低,但无明显差异(P0.05);随着转染时间增加,细胞增殖率急剧下降,当转染时间在48小时的时候增殖率下降最为显著;在转染72小时后,细胞增殖能力仍比未转染细胞有显著降低,但相比48小时后的转染率相差不大。综合来看,当用50nMsiRNA转染细胞时细胞的增值率最低,且在48小时后效果最为显著。进一步采用流式细胞分析法观察siRNA转染48小时后细胞凋亡情况。与未转染细胞相比,细胞凋亡的比率在转染后明显升高(P0.05或P0.01),并随浓度增加而更为显著。用中、高浓度的siRNA干扰NBS1表达后,HepG2细胞在S期的比例增加(P0.05)。结合上述siRNA可以抑制细胞增殖的实验结果,我们推测干扰NBS1的表达可以通过使细胞在S期发生阻滞而抑制细胞继续增殖。与对照组比较,转染24小时后共有14个基因表达量上调,7个基因表达下调;而在转染48小时后,共有15个基因表达上调,5个基因表达下调。通过聚类图显示2个时间点的差异基因存在不同,韦恩图结果显示两个时间点共有的差异表达基因为11个,其中8个基因表达上调,包括IRS1、MET、CCND1、IFG2、PTK2、YAP1、MYC、PTEN;3 个基因表达下调,分别为 CDH13、TGFB1、AKT1。这些基因可能作为NBS1作用的下游靶点,调控肝细胞癌的进展。GO分析可知干扰NBS1后的差异表达基因除了影响基本的细胞生命活动功能,主要还可以调控细胞周期及细胞迁移等;而KEGG结果显示差异基因主要参与调控的信号通路包括癌症通路、前列腺癌及结直肠癌等信号通路。结论:NBS1基因的rs1 805794 C/G多态性在HBV感染者中增加了患肝细胞癌的风险,很可能是中国汉族人群慢性HBV感染者患肝细胞癌的遗传易感性因素。2.通过Meta分析,我们知道rs1 805794 C/G多态性可能对增加癌症的易感性有至关重要的影响,尤其在肝癌、白血病及鼻咽癌病种及亚洲人群中。3.干扰NBS1在HepG2细胞中的表达可以使细胞周期停滞在S期,抑制细胞增殖并诱导细胞调亡,通过进一步的实验和生物信息学分析,我们对NBS1下游调控的靶点基因及通路有了初步的了解。意义:1.研究了中国汉族人群中NBS1 SNPs与HBV相关HCC易感性的关系。2.进一步系统综述了不同种族群体中NBS1 rs1805794 C/G多态性与包括肝癌在内的各种癌症易感性的关系。3.研究了NBS1基因对HepG2生物学功能的影响,并初步探究基因调控对肝癌细胞功能的影响机制。4.通过研究将有助于从基因突变及信号通路等角度研究HCC的发病机制,也为伴有NBS1突变和表达异常的HCC进行早期诊断和靶向治疗提供理论依据。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 李子涵;熊婷;熊晓丽;卢子贤;周志刚;涂剑;;甲硫氨酸腺苷转移酶1A/2A平衡与肝细胞癌[J];生物化学与生物物理进展;2018年12期
2 Kanwal F;任天棋;牛俊奇;;非酒精性脂肪性肝病患者发生肝细胞癌的风险评估[J];临床肝胆病杂志;2019年01期
3 张斯娜;郭小娟;陈钢;;差异甲基化位点对肝细胞癌预后的相关性分析[J];肝胆胰外科杂志;2019年01期
4 ;液体活检技术有望成为检测肝细胞癌的新手段[J];微创医学;2017年06期
5 曾姗姗;;经肝动脉化疗栓塞术治疗肝细胞癌的研究进展[J];中国医药导报;2016年33期
6 康富标;王玲;孙殿兴;;肝细胞癌免疫检查点阻断治疗的研究进展[J];中国免疫学杂志;2017年02期
7 骆永恒;肖恩华;;功能性磁共振成像对经肝动脉化疗栓塞术治疗肝细胞癌的效果评价[J];临床肝胆病杂志;2016年12期
8 孙培伟;白雪莉;陈义刚;高顺良;张匀;楼健颖;阙日升;梁廷波;;合并肝细胞癌多原发癌临床特点(附25例报告)[J];中国实用外科杂志;2017年03期
9 段小飞;张水军;;肝细胞癌微血管侵犯诊治[J];中华肝脏外科手术学电子杂志;2017年02期
10 郑美玲;华海清;;奥沙利铂治疗肝细胞癌耐药的相关机制研究进展[J];临床肿瘤学杂志;2017年04期
11 王春艳;吴斌;兰川;邓大炜;张光年;冷政伟;李建水;;经导管肝动脉化疗栓塞术联合索拉非尼治疗晚期肝细胞癌的效果[J];中国医药导报;2017年14期
12 杨永平;;肝细胞癌防治热点与挑战[J];肝癌电子杂志;2016年02期
13 郝蕊;李想;郭玉明;彭健;孟坤;;阿可拉定治疗肝细胞癌及其他肿瘤的机制[J];肝癌电子杂志;2016年02期
14 王瀚;丛文铭;;双表型肝细胞癌新亚型的临床病理学研究进展[J];中国肿瘤临床;2017年12期
15 章泽宇;程红岩;;PET/CT在肝细胞癌中的临床应用及进展[J];临床肝胆病杂志;2017年07期
16 沈利;李红霞;;趋化因子及其受体在肝细胞癌中的相关研究进展[J];肝脏;2017年10期
17 董德硕;刘兆玉;;槐耳颗粒联合经肝动脉化疗栓塞术治疗肝细胞癌的研究进展[J];临床肝胆病杂志;2017年10期
18 ;液体活检技术或有望成为早期方便检测肝细胞癌的新型手段[J];生物医学工程与临床;2017年06期
19 朱晓佳;杨力;;2004-2009年间美国非酒精性脂肪性肝病与肝细胞癌的关系[J];临床肝胆病杂志;2016年01期
20 孟坤;郭玉明;;肝细胞癌机制研究进展及靶向治疗药物研发与应用[J];肝癌电子杂志;2015年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杨甲梅;;肝细胞癌外科治疗摘要[A];发挥中西医优势治疗原发性肝癌——香山科学会议第461次学术讨论会画册[C];2013年
2 卞读军;;肝细胞癌经导管动脉化疗栓塞前后磁共振波谱研究[A];2009中华医学会影像技术分会第十七次全国学术大会论文集[C];2009年
3 贾建伟;赵洁;;肝细胞癌领域研究现状与进展[A];中医药防治感染病之研究(九)——第九次全国中医药防治感染病学术交流大会论文集[C];2009年
4 陈孝平;;肝细胞癌外科治疗进展[A];湖北省第21届肿瘤学术大会论文汇编[C];2011年
5 肖恩华;;不同TACE方式治疗肝细胞癌病理分子生物学改变[A];中华医学会第十八次全国放射学学术会议论文汇编[C];2011年
6 李旭;;中国东北地区肝细胞癌病因学及治疗方法的分析[A];中华医学会第十三次全国感染病学术会议论文汇编[C];2014年
7 段文龙;黎乐群;;乙型肝炎血清标记物与肝细胞癌根治术后患者预后的相关性分析[A];第八届中国肿瘤学术大会暨第十三届海峡两岸肿瘤学术会议论文汇编[C];2014年
8 赵艳;王新;卢桂芳;卢新兰;和水祥;;黄芪及其有效成分治疗肝细胞癌相关研究的系统综述[A];第九届中医/中西医结合循证医学方法研讨会会议材料[C];2015年
9 裴世红;刘剑勇;黎乐群;;术前肝动脉化疗栓塞术治疗肝细胞癌的临床研究[A];第十五届全国肝癌学术会议资料汇编[C];2015年
10 汪启东;赵艺蕾;杨根仁;鲍永华;林冰影;汪启东;赵艺蕾;杨根仁;鲍永华;林冰影;;弥散加权成像对肝细胞癌索拉菲尼治疗疗效评估的问题[A];2014年浙江省医学会放射学学术年会论文集[C];2014年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王碧波;肝细胞调控肝血窦内皮细胞影响肝再生机制及肝损伤干预新策略[D];中国人民解放军海军军医大学;2018年
2 刘静;联合干预肝细胞氧和氧化应激感受器抑制肝纤维化的实验研究[D];东南大学;2017年
3 姬翔;G9A在人类肝细胞癌中的表达分析及对肝细胞癌细胞增殖和自噬的作用研究[D];武汉大学;2015年
4 鲍蕾蕾;AGTR1对肝癌细胞生物学特性影响及其靶向治疗作用的实验研究[D];中国人民解放军海军军医大学;2018年
5 刘文斌;肝细胞癌中的乙肝病毒基因整合规律及其促癌作用研究[D];中国人民解放军海军军医大学;2018年
6 郑琳;外周血Midkine、CTCs检测在肝细胞癌诊断与介入治疗疗效评估中的研究[D];郑州大学;2018年
7 胡姣姣;HBx上调IncRNA UCA1参与肝细胞癌发生机制的研究[D];东南大学;2016年
8 潘耀振;POU5F1B通过激活AKT,miR-660通过抑制PPP2R2A促进肝细胞癌的增殖[D];苏州大学;2018年
9 林志坤;整合素β5在肝细胞癌中的生物学功能及机制研究[D];大连医科大学;2018年
10 张起帆;AIF-1在肝细胞癌中的表达的临床意义及其对肝癌细胞细胞生物学行为的影响[D];南方医科大学;2018年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 郭家宝;鞭毛素蛋白刺激的肝细胞对T细胞功能的调节机制[D];中国科学院大学(中国科学院武汉病毒研究所);2018年
2 左刚;肝细胞癌MRI与DSA的影像对比研究[D];吉林大学;2018年
3 夏梦莹;磁共振扩散峰度成像在评估肝癌TACE术后疗效中的应用研究[D];山东大学;2018年
4 陈茂东;基于MR影像组学的肝细胞癌与血管瘤鉴别诊断的应用研究[D];南方医科大学;2018年
5 倪菲;TACE联合RFA及阿帕替尼治疗中晚期肝细胞癌的临床研究[D];昆明医科大学;2018年
6 田野;DSA与增强CT对于肝细胞癌术后早期复发的影像学对比研究[D];河北医科大学;2018年
7 任浩;人脐带间充质干细胞治疗后乙型肝炎肝硬化患者发生肝细胞癌的危险因素分析[D];安徽医科大学;2018年
8 李元涛;乙型肝炎病毒相关性肝癌的发病机制及抗病毒治疗进展[D];河北医科大学;2018年
9 田亚英;脂联素通过上调ACSL1抑制肝细胞脂性凋亡[D];南华大学;2018年
10 黄耀;RAGE、MKK4、MKK7及JNK1在2型糖尿病合并原发性肝癌患者中的表达[D];广西医科大学;2015年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 袁于飞;我科学家发现肝细胞癌精准治疗的潜在新靶点[N];光明日报;2019年
2 记者 刘垠;我科学家发现肝细胞癌精准治疗的潜在新靶点[N];科技日报;2019年
3 记者 王丹 管九苹;肝细胞癌标志物研究获新进展[N];健康报;2013年
4 李杰;不能手术切除肝细胞癌的治疗[N];科技日报;2006年
5 本报通讯员 戴瑶 崔黛珩 曹容嘉 杨妹;平凡中的独特[N];中国科学报;2019年
6 中国抗癌协会临床肿瘤学协作专业委员会主任委员 秦叔逵;治疗肝细胞癌 别只盯着靶向药[N];健康报;2013年
7 ;新化合物 有望对抗肝细胞癌[N];健康报;2006年
8 吴一福;四军医大唐都医院发现硒蛋白P与肝细胞癌发生有关[N];中国医药报;2007年
9 刘毅峰;姑息治疗未占主导地位[N];医药经济报;2003年
10 湖南中医药大学第一附属医院国家中医肝病防治中心;丙肝是沉默的疾病[N];大众卫生报;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978