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洛伐他汀对缺氧复氧心肌细胞保护作用的研究

周苏宁  
【摘要】:目的 探讨(1) 洛伐他汀对缺氧复氧心肌细胞线粒体活性保护及抗氧化作用。(2) 洛伐他汀(LOV)对缺氧复氧及PCI病人血清诱导心肌细胞NF-κB活化及其调控TNF-αmRNA、IL-1βmRNA、iNOS mRNA和蛋白表达的作用。 方法 (1) 采用24h内乳大鼠心肌组织块,结合差速贴壁和化学试剂抑制法纯化心肌细胞的培养方法,用自制简易充氮装置建立培养心肌细胞缺氧复氧实验模型。通过倒置显微镜、HE染色、电镜、免疫细胞化学染色、台盼蓝排斥实验、PAS糖原染色及上清液CK-MB、Mb、cTnI快速检测,并应用Image-Pro Plus图像分析系统对免疫细胞化学和PAS染色进行定量分析。对培养心肌细胞及缺氧复氧模型进行了较全面的鉴定。(2)采用MTT实验、生化及比色法,以洛伐他汀终浓度分别为5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L和心肌细胞共孵育,观察不同剂量的LOV对心肌细胞线粒体活性的影响:并选择有效剂量(5μmol/L、10μmol/L)观察对缺氧复氧模型心肌细胞线粒体活性、培养上清液中CK-MB、LDH_1MDA、SOD的影响。(3) 采用免疫细胞化学、激光扫描共聚焦显微技术、RT-PCR、ELISA及NO比色法,并采用Gel-Pro图像分析系统对PCR特异性表达条带进行定量分析。观察洛伐他汀对缺氧复氧模型、PCI病人血清NF-κB活化、TNF-α、IL-1β、iNOS基因表达及蛋白转录水平和NO释放的影响。


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