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人肝门部胆管癌裸鼠肝门移植模型的建立及CD、HSV-tk双自杀基因治疗实验研究

李志伟  
【摘要】:目的 建立人肝门部胆管癌裸鼠肝门移植模型,对其生物学特性进行初步探讨。 方法 收集第90代肝门部胆管癌细胞系FRH细胞(2×10~6)接种于6只Balb/c裸鼠后肢背侧皮下,两周左右,有5只Balb/c裸鼠后肢背侧皮下移植瘤长至约8mm×6mm,切取裸鼠皮下移植瘤边缘直径约1mm组织块植入Balb/c裸鼠肝门部肝实质内,共32只,观察裸鼠生活情况。每周取两只裸鼠在麻醉下剖腹探查,观察肝门部肿瘤生长状况,测量肿瘤直径,计算肿瘤体积,绘制裸鼠肿瘤生长曲线。待裸鼠出现黄疸,全身衰竭时,予以处死,抽血检查肝功能;解剖肝门部肿瘤及观察周围浸润情况,有、无远处脏器转移并行病理检查。裸鼠肝门部移植瘤与人肝门部胆管癌标本进行比较,观察肿瘤病理结构;透射电镜观察肿瘤细胞超微结构;免疫组化检测VEGF、bFGF、PCNA、bcl-2、Fas、P53、P21、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2、CD34表达情况,测定肿瘤微血管密度(MVD),。 结果 32只裸鼠建成30只肝门部肿瘤移植模型,成瘤率94%;建成的30只模型中28只出现黄疸,黄疸出现率为93%。接种后2周左右可触及肝门部有小结节,平均4周左右出现黄疸,6周左右裸鼠开始出现恶液质。解剖发现肝门部有肿瘤生长,肿瘤生长较快,长径1.8~2.8cm,包膜不完整,向周围组织浸润。主要向肝实质内生长,8例侵及胆囊,6例浸及肝门血管,3例腹腔淋巴结转移。肾脏、脾脏、胃肠、肺脏未见转移灶。肝功能检查显示:ALT 86±28.7U/L,AST 98±31.3U/L,GGT 122±41.6U/L,ALP 168±65.8U/L,TBIL 35±13.6μmol/L,DBIL 31±11.5μmol/L,均明显高于正常对照组。肝门肿瘤HE染色呈低分化胆管腺癌表现,与人肝门部胆


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