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乙酰肝素酶反义寡核苷酸诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

汪素文  
【摘要】:目的 在体外实验中,通过观察乙酰肝素酶(HPA)反义寡核苷酸AS-ODN对人胃腺癌细胞株SGC-7901细胞HPA-mRNA表达的影响,探讨其对胃癌细胞的抑制作用;通过观察AS-ODN诱导SGC-7901细胞的凋亡及与凋亡调控基因p53、bcl-2、Survivin表达的关系,探讨其诱导胃癌细胞凋亡的可能性及其机制;通过观察AS-ODN对细胞间粘附分子CD54、血管内皮生长因子VEGF、基质金属蛋白酶MMP-2以及基质金属蛋白酶抑制剂TIMP-2表达的影响,探讨其抑制胃癌细胞的作用机制。 方法 根据HPA的基因序列设计互补于mRNA起始密码区的反义寡脱氧核苷酸(AS-ODN),并设计与其碱基组成相同,但碱基顺序随机排列的无义寡核苷酸(NS-ODN)作为对照。寡核苷酸序列行硫代磷酸化修饰。实验分为正常对照组(不进行转染)、脂质体对照组(转染时只加脂质体)、NS-ODN组(以脂质体转染NS-ODN)和AS-ODN组(以脂质体转染AS-ODN)。根据预试验结果,在以10μl/ml脂质体转染的情况下,选择0.2、0.4、0.8μmol/L为终浓度进行实验。按照脂质体介导法将HPA反义寡核苷酸转染已培养处于对数生长期的SGC-7901细胞,在37℃,5%CO_2培养箱中培养,24、48、72小时后收集细胞,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测转染前后细胞


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