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运用nestin-EGFP转基因小鼠研究脑和胰腺中nestin阳性细胞的体外增殖分化潜能

王晓静  
【摘要】:背景: 近年来,干细胞的研究成为生物医学领域的一个热点,引起了广大研究者的关注,是因为干细胞的研究为一些长久困扰人们的医学难题和顽症提供了治疗新思路。有些成体干细胞的研究比较深入,如造血干细胞和神经干细胞;有的刚刚开始,如胰腺干细胞、皮肤干细胞、肝干细胞等。总的来说现在干细胞的研究还处于初级阶段,还有许多问题没有解决:干细胞由于缺乏特异性的标记,其分离纯化还未有好的解决方法;体外培养体系的建立还不完善;干细胞的增殖、分化的确切分子机制尚不清楚;目前诱导干细胞向某些表达特异标记的细胞分化,尚未找到成熟的方法等等。此外,干细胞研究与胚胎的伦理地位、克隆人等若干问题也有着极为密切的关系。 目的: 本课题旨在通过建立细胞内源蛋白nestin的启动子/增强子所驱动的报告基因EGFP表达的转基因小鼠,经过流式细胞仪分选出脑和胰腺中nestin阳性细胞,在体外检测脑来源的nestin阳性细胞是否具有神经干细胞的增殖分化潜能,能否代表神经干细胞群体;胰腺来源的nestin阳性细胞是否是胰腺的干细胞,是否具有干细胞的特性。这为神经干细胞的分离纯化提供一种可行有效的方法,并为胰腺干细胞的初步研究提供一套简便可靠的体外分离、培养、诱导分化、鉴定的方法。这对于研究神经系统和胰腺的发育过程,研究发育机制及临床治疗神经系统疾病和糖尿病都具有十分重要的意义。 方法: 1.转基因小鼠的获得:纯化基因片段nestin-hsp68-EGFP,用显微注射方法把基因片段注射到受精卵的雄原核中,获取转基因小鼠。 2.转基因小鼠nestin表达模式的鉴定:通过荧光显微镜观察和以小鼠尾巴基因组DNA为模板的PCR反应来鉴定阳性转基因小鼠,分别取胚胎、成年小鼠


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