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糖尿病大鼠MMP-2/TIMP-2的动态变化及其在糖尿病肾病发病机制中的作用研究

刘明花  
【摘要】:研究背景及目的 糖尿病肾病(diabetic nephropathy DN)是糖尿病(diabetes mellitus DM)的重要并发症和致死原因,也是造成慢性肾衰的常见原因之一。其主要病理特点是系膜区系膜细胞增生,大量基质堆积,系膜区变宽或结节形成及肾小管、肾小球基底膜(glomerular basement membrane GBM)增厚,随着病情的进展逐步发展为肾小球硬化,最终导致整个肾脏功能的丧失。肾小球系膜基质堆积和GBM增厚的主要原因目前认为是山于细胞外基质(extracellular mattix ECM)代谢紊乱,其合成增加和(或)降解减少所致。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases MMPs)是ECM的主要降解酶。研究表明MMPs特别是明胶酶及其特异性抑制剂基质金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitor of matrix metalloproteinases TIMPs)参与了多种肾脏疾病的发病过程,然而对于其是否参与糖尿病肾病的发生、发展,以及其具体作用机制尚不清楚。本研究用链脲佐菌素制成了糖尿病大鼠模型,首次从基因表达、蛋白及生物活性三个水平对不同病程DM大鼠的血清和肾组织MMP-2及其特异性抑制因子TIMP-2进行检测,同时检测了Ⅳ型胶原(type Ⅳ collagen Ⅳ-C)在肾脏的表达并观察肾脏功能及其形态学的动态变化,分析它们之间的相关关系,探讨MMP—2/TIMP—2在DN发病机制中的作用,为DN的早期防治开拓一种新思路。 研究方法: 1.建立DM大鼠模型:选6-8周龄Wistar大鼠,体重200-250克,分为正常对照组(NC)和糖尿病组(DM),再分别分为1周、4周、8周、12周、20周组,糖尿病模型采用禁食12小时后一次性按60mg/kg腹腔注射链脲佐菌素STZ(Sigma公司),3d后取尾静脉血,测定血糖,取在整个病程中血糖≥16.7mmol/L的为糖尿病大鼠。 2.肾脏功能的检测:宰杀前一天用代谢笼收集24小时尿,测24小时尿蛋白定量


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