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腺病毒介导的人骨形成蛋白2(Ad-hBMP2)基因转染促进兔下颌牵张成骨(DO)的实验研究

陈安威  
【摘要】:目的: 1.骨形成蛋白2(Bone Morphogenetic Protein 2,BMP2)是转化生长因子β(Transforming Growth Factor β,TGF β)超家族的成员之一,也是生长因子的一种。它的主要生物学作用是诱导未分化的间充质细胞分化增殖,形成软骨和新生骨。所以具有巨大的潜在临床应用价值。本实验将建立扩增、纯化和生物活性鉴定腺病毒介导的人BMP2(Ad-hBMP2)重组腺病毒的有效方法,为进一步研究应用Ad-hBMP2进行兔下颌牵张成骨基因治疗奠定基础。 2.牵张成骨(distraction osteogenesis,DO)是近年发展起来的一项颇有价值的外科技术,它具有极大的临床应用潜力。虽然牵张成骨成功率很高,但却需要一个很长的固定阶段并且确有失败发生。骨形成蛋白类具有促进骨折和阶段性骨缺损愈合的作用,但它们对下颌骨牵张成骨的作用仍存初步研究中。本实验通过在兔下颌骨牵张成骨模型上局部应用Ad-hBMP2,探讨其在DO过程中的作用和机理,以寻找一种缩短DO疗程的新方法。 方法: 实验一,应用人胚肾293细胞作为包装细胞,扩增携带hBMP2表达片段的重组腺病毒载体Ad-hBMP2和携带增强型绿色荧光蛋白(enhance green fluorescent protein,EGFP)表达片段的重组腺病毒载体Ad-EGFP,利用氯化铯密度梯度超速离心法对其进行纯化,应用50%感染量测定(infectious dose 50,ID_(50))方法对纯化病毒液进行病毒滴度测定。选用6只成年新西兰大白兔(体重3.0~3.5kg),分别在两侧股部肌肉以100μl的


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