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重组人白细胞介素18的纯化、复性及其生物活性检测

陈文芳  
【摘要】:目的 白细胞介素18是新近发现的一种细胞因子,具有显著诱导IFN-γ产生的功能,又称IFN-γ诱生因子。IL-18具有多种生物学功能:促进淋巴细胞的增殖,诱导TH1类细胞因子的产生,增强NK细胞的杀伤活性等。进一步研究表明:IL-18在抗感染、抗肿瘤、免疫调节等方面具有重要作用,显示出广阔的应用前景。故可以将其开发为一种治疗用生物制品。稳定的生产工艺是批量生产的前提,本文就其生产工艺进行研究,建立一种稳定的纯化、复性工艺,为将来的产业化奠定良好的基础。 方法和结果 1.IL-18原核细胞表达系统的建立和高效表达菌株的筛选 成熟的有活性的IL-18有157个氨基酸组成,根据IL-18基因的序列,采用化学合成法合成IL-18的cDNA,重组于表达载体pBV_(220)中,转化大肠杆菌DH_(5α),筛选获得高效表达工程菌,经仞步检定表达量达30%左右。并对该重组质粒在不同类型的大肠杆菌中的表达情况进行了比较,发现IL-18在BL21中表达稳定,能够满足批量生产的要求。 2.工程菌发酵和IL-18的诱导表达 工程菌内含有表达载体pBV220,其中含有强启动子P_LP_R,及热敏蛋白基因,可以通过升高温度来诱导蛋白表达。工程菌接种于摇瓶的LB液体培养基中30℃振荡培养,扩增获得一级种子液,再按1%转种扩大培养获得二级种子液,达到一定量后按10%转种于发酵罐中已灭菌的LB+M9培养基中,30℃培养,并通过通气量和搅拌速度控制溶氧、用碱调pH值,适当补料,进一步增菌至一定密度后,升温至42℃热诱导,诱导4h表达IL-18。通过发酵参数的控制,使细菌生长旺盛,并在对数生长


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