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乙酰葛根素对低糖低氧损伤大鼠皮层神经元的保护作用

蔡雅卫  
【摘要】:目的 缺血性脑血管疾病是严重危害人类健康的一类疾病,是人类死亡的主要原因之一。溶栓治疗在为患者带来康复希望的同时,也带来了不容忽视的问题—脑缺血再灌注损伤。因此在缺血性脑血管疾病的治疗方面在开展溶栓治疗的同时积极寻找有效的脑保护药物具有重要的意义。乙酰葛根素是在葛根素的基础上引入侧链得到的新型异黄酮类化合物。实验证明,乙酰葛根素能缩小大脑中动脉栓塞大鼠的脑梗死面积,提高损伤大鼠的神经生物学评分,改善脑组织的缺血损伤,对缺血性脑血管疾病可能有一定的治疗作用。本试验的目的是从细胞及分子水平上,通过体外培养大鼠皮层神经元建立“缺血再灌注”损伤模型,观察乙酰葛根素对神经元的保护作用并进一步探讨其保护作用机制。 方法 无菌条件下进行大鼠皮层神经元原代培养,加入阿糖胞苷抑制非神经元细胞的生长进行纯化,免疫细胞化学ABC法进行神经元特异性烯醇化酶(NSE)鉴定,证实培养的细胞为神经元并确定其纯度。取培养12d的细胞,随机分组为:①正常组;②低糖低氧损伤组;③乙酰葛根素高、中、低浓度组(1.6×10~(-6)mol/L、4×10~(-7)mol/L、1×10~(-7)mol/L);④葛根素组(4×10~(-7)mol/L)。正常对照组常规换液一次,除去其余各组细胞的原培养液,用无糖Earle’s液洗2遍后,加入含5×10~(-4)mol/L连二亚硫酸钠的无糖Earle’s液,置培养箱中37℃、5%CO_2、饱和湿度下培养2h后,换成DMEM完全培养基继续培养,模拟体内缺血再灌注过程。各给药组在损伤处理过程中分别加入含不同浓度乙酰葛根素或葛根素的无糖Earle’s液及DMEM完全培养基。再灌注损伤24h后MTT法检测各组细胞的存活率,倒置相差显微镜下进行一般形态学观察,比色法检测细胞培养液中LDH活性、H_2O_2含量,并检测细胞内SOD、GSH-px活性及MDA含量。流式细胞术测定皮


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