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腺病毒介导的hBMP-2基因转移修复颌骨缺损的实验研究

王克涛  
【摘要】:目的: 1.建立兔骨膜源性成骨细胞(periosteal-derived osteoblasts,POBs)系,观察其基本生长特性和生物学特征,比较冻存前后的细胞形态及生物学特点,初步建立“成骨细胞库”,为下一步的研究奠定基础。 2.构建了含人骨形成蛋白-2(human bone morphogenetic protein,hBMP-2)基因和含绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的重组腺病毒表达载体(Ad-hBMP-2,Ad-GFP),并进行鉴定、扩增、和纯化。 3.应用构建的Ad-hBMP-2转染骨膜源性成骨细胞,研究骨膜源性成骨细胞转染后生物学行为的变化和目的基因的表达,应用Ad-GFP转染细胞,测定腺病毒转染效率。 4.应用体内法(in vivo)和体外法(ex vivo)进行hBMP-2基因转移,研究Ad-hBMP-2及其转染的兔骨膜源性成骨细胞在免疫活性动物体内异位成骨能力和目的基因表达的维持时间。 5.应用体外法和体内法进行hBMP-2基因转移,分别构建了hBMP-2基因修饰的组织工程化骨和hBMP-2基因活化的磷酸三钙(tricalcium phosphate,TCP),研究其对兔下颌骨缺损的修复效果。 6.牵张成骨(distraction osteogenesis,DO)作为一种内源性骨组织工程,已越来越多地用于颅颌面发育不足和骨缺损的外科治疗,但需要较长的固定时间并有新骨形成不良等并发症。本实验建立了兔双侧下颌骨牵张成骨模型,在固定期开始,应用体外法和体内法将hBMP-2基因转移到牵张区,研究其在DO新骨形成中的作用,以寻找促进DO骨质形成、缩短DO疗程的方法。


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