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外周血淋巴细胞HLA-A mRNA检测在肾移植早期排斥反应中的作用探讨

李晓丽  
【摘要】:目的: 1.建立检测外周血淋巴细胞(PBL)人类主要组织相容性抗原-A(HLA-A)mRNA的一步法荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)的方法,初步应用于肾移植患者移植前后外周血淋巴细胞HLA-AmRNA表达的检测。探讨淋巴细胞HLA-A mRNA的表达与机体免疫状态及移植后早期急性排斥反应的关系。 2.通过对HLA-A mRNA、CD4/CD8比值、血肌酐(sCr)、尿素氮(BUN)、淋巴细胞数各项指标的比较,探讨淋巴细胞HLA-A mRNA作为早期急性排异反应评估指标的价值。 方法: 依据GenBank中人HLA-AmRNA序列,根据HLA-A基因外显子4、5中的保守序列自主设计、筛选引物及探针;以管家基因葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose6-phosphate dehydrogenasem,G6PDH)作为内参照,设计引物及探针。运用Taqman探针技术,荧光定量RT-PCR扩增HLA-A mRNA和G6PDH mRNA。检测35例随访的肾移植患者的术前及术后半年内不同时间的标本的阈循环数(Ct)和60例正常对照的阈循环数(Ct),采用REST软件分析其外周血淋巴细胞表面HLA-A mRNA的相对表达量。测定值大于等于正常值或者在连续监测过程中表达较前显著增强的肾移植患者,考虑有早期急性排斥反应发生。以流式细胞术连续检测CD4/CD8比值,ELISA检测免疫抑制剂药物浓度,评估机体的免


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