收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

扫描电化学显微术结合微反应器的单细胞分析

孙富禅  
【摘要】:本论文共分两部分:Ⅰ.微反应器的构建、表征及结合扫描电化学显微术(Scanning Electrochemical Microscopy,SECM)的应用;Ⅱ.扫描电化学显微术结合微反应器定量测定人单个中性粒细胞中的过氧化物酶(PO)。 第一部分我们制作了一种适于SECM现场电化学检测用的微反应器,并用该微反应器对辣根过氧化物酶(HRP)活性进行了测定。首先在表面平整的有机玻璃上构建一个微池,将HRP及其底物H_2Q和H_2O_2用自制微量加样器加入到微池中孵育,然后在微池口上方推片浇筑多孔硝酸纤维素膜,从而制得微反应器。将带有HRP和底物H_2Q、H_2O_2的微反应器放入含PBS、H_2Q、H_2O_2的电解池中,直径20μm的Au工作电极作为SECM的探头插入上述电解池的溶液中,并逼近到微反应器,在微反应器上方扫描。通过检测扩散出微反应器的酶催化反应的产物BQ的还原电流而测定HRP的量。我们对电极电位,底物的浓度,电化学检测的重现性,孵育时间和微池直径及深度等几种因素进行了研究,确定了HRP检测的最佳实验条件为:pH 7.4的PBS缓冲溶液;H_2Q的浓度为2.00×10~(-3)mol/L,H_2O_2的浓度为2.00×10~(-3)mol/L;探头电位为-0.3V(vs.Ag/AgCl);孵育20 min.;电极为直径20 μm的金圆盘电极;微池直径为200 μm、深度为550 μm。在最佳实验条件下,HRP的线性检测范围在7.50×10~(-9) U—5.63×10~(-7)U之间,检测限可达到3.7x10~(-9)U。同以往方法相比,本方法中待测酶在溶液中处于游离状态,可以最大限度保持其活性。并且本实验中采用孵育和推片浇膜的措施,大大提高了信号灵敏度。另外,此方法中没有氧的干扰和电极被污染的情况。 第二部分我们利用微反应器对中性粒细胞提取液及单个中性粒细胞中的过氧化物酶(PO)进行了测定。为使细胞溶膜更方便,细胞先用Dig穿孔,然后用自制细胞加样器将单个细胞加入到微池内,通过冻融法溶膜,再用自制微量加样器加入15 nL的含2.00x10~(-3)mol/L H_2Q与2.00x10~(-3)mol/L H_2O_2的PBS缓冲溶液,用封口膜封口并避光孵育20 min.,硝酸纤维素浇膜之后,置于电解池中进行SECM线性扫描。基于SECM扫描曲线上BQ产生的峰电流的大小,利用工


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 ;《单细胞分析》[J];分析化学;2007年01期
2 邹韵霞;邓钧华;;长春花愈伤组织培养过氧化物酶同工酶等电点聚焦研究[J];中山大学学报(自然科学版);1987年02期
3 朱光华,解新明,杨锡麟;鹅观草属与披碱草属属界划分的酯酶和过氧化物酶同工酶比较研究[J];西北植物学报;1990年01期
4 殷培杰,李培军,刘宛;氯苯甲酸植物毒性实验中抗氧化酶变化的量化研究[J];环境科学研究;2005年05期
5 黎雪莲,袁若,柴雅琴,王娜,朱强;基于溶胶-凝胶化的普鲁士蓝/纳米金修饰铂电极的辣根过氧化物酶传感器(英文)[J];西南师范大学学报(自然科学版);2005年05期
6 郝峰鸽;杨立峰;周建;;7种木本豆科植物抗氧化酶活性研究[J];安徽农业科学;2006年19期
7 胡彦江;张茹琴;王瑞荣;柏素花;;水杨酸、乙酰水杨酸对番茄幼苗叶片中PPO和POD的诱导作用[J];西北植物学报;2007年02期
8 王峥;车淑红;李小娟;王丽;魏小辉;宋雅娟;秦丽;王清华;王林嵩;;油菜中过氧化物酶及相关生化指标的研究[J];河南师范大学学报(自然科学版);2007年01期
9 叶林奇;向邓云;;濒危植物桫椤过氧化物酶的分离纯化与性质[J];重庆工商大学学报(自然科学版);2007年04期
10 张晗;沙伟;郑琦;高永超;李汝玉;宋国安;;两种紫萼藓科植物的POD和SOD同工酶分析[J];山东农业科学;2007年05期
11 王兰;李涌泉;闫博;刘娜;王茜;;Cd对河南华溪蟹(Sinopotamon henanense)主要组织器官SOD和POD同工酶的影响[J];应用与环境生物学报;2007年06期
12 李梅金;郭光美;张丽梅;陈海玲;邱彬;;病害肉速测仪对鸡鸭牛羊肉响应特性研究[J];福州大学学报(自然科学版);2008年01期
13 王琳;岳晓翔;王宝山;;不同生境下两种表型盐地碱蓬叶片POD比较研究[J];山东师范大学学报(自然科学版);2008年04期
14 李小安;周青平;;低温胁迫对扁蓿豆的脯氨酸含量和POD、SOD酶活性的影响[J];青海大学学报(自然科学版);2009年01期
15 张道海;苏风岩;丁鉴;;Frankia菌同功酶图谱分析和分类[J];微生物学杂志;1989年03期
16 楼锡元;朱水星;夏晓军;;应用愈伤木酚法鉴定玉米种子真实性试验[J];种子世界;1989年11期
17 向显智;胡萝卜的愈伤组织诱导及其几种酶和可溶性蛋白质的变化[J];华中师范大学学报(自然科学版);1990年04期
18 肖翊华,徐孟亮,刘文芳;农垦58s育性转换与吲哚乙酸氧化酶和过氧化物酶的关系[J];武汉植物学研究;1992年02期
19 杨英,李合生;甘薯块根抗黑斑病的生理机制[J];华中农业大学学报;1993年02期
20 罗桂花;两个海拔的扁蓄群体过氧化物酶同工酶分析[J];青海师范大学学报(自然科学版);1996年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 罗国庆;唐翠明;王振江;吴福泉;吴剑安;杨琼;陈列辉;钟建武;黄炳辉;肖阳;邢东旭;;桑树杂交组合抗青枯病能力鉴定及与抗病相关酶活性的研究[A];中南五省区蚕桑育种协作研讨会论文集[C];2009年
2 李建芳;蒲彪;周枫;;鱼腥草中POD和PPO特性的研究[A];中国食品科学技术学会第五届年会暨第四届东西方食品业高层论坛论文摘要集[C];2007年
3 廖德志;吴际友;王旭军;程勇;;氮磷钾不同配比施肥对台湾桤木抗氧化酶的影响[A];第二届中国林业学术大会——S4 人工林培育理论与技术论文集[C];2009年
4 陶书田;张绍铃;;过氧化物酶与梨果实石细胞形成的关系[A];中国园艺学会2010年学术年会论文摘要集[C];2010年
5 刘月环;萨晓婴;吴旧生;;四种实验动物腹腔巨噬细胞髓过氧化物酶活性的初步研究[A];中国实验动物学会第六届学术年会论文集[C];2004年
6 余小林;曹家树;叶纨芝;;CYP86MF反义基因转化不育植株相关同工酶的比较[A];中国园艺学会第六届青年学术讨论会论文集[C];2004年
7 郝志敏;蒋继志;徐淑华;姚大军;;几种植物提取物对马铃薯块茎中POD和APX活性的影响[A];中国植物病理学会2004年学术年会论文集[C];2004年
8 秦菲;刘国顺;王彦亭;;烟草根系生长过程中内源激素含量的变化规律[A];中国烟草学会2004年学术年会论文集[C];2004年
9 王楠;牟颖;孙晔;吕绍武;闫岗林;罗贵民;;含硒单链抗体酶的制备及其抗氧化作用[A];第七届全国酶学学术讨论会论文摘要集[C];2004年
10 史晓儒;李玉英;张政;王转花;;苦荞麸皮中一种过氧化物酶的纯化及部分性质研究[A];2004年全国生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王晓蕾;扫描电化学显微镜测定单细胞内的过氧化物酶和纳米电极的应用[D];山东大学;2003年
2 李文鹏;单个中性粒细胞中过氧化物酶、过氧化氢、活性氧的测定[D];山东大学;2006年
3 郭忠;固定化酶微反应器和混合基体应用于MALDI TOF-MS的肽谱分析和小分子分析[D];中国科学院研究生院(大连化学物理研究所);2003年
4 何智慧;毛细管电泳酶免疫分析电化学检测及应用[D];山东大学;2002年
5 陈阳;新疆盐生植物生理生态适应性及硅提高植物抗盐作用机制的研究[D];甘肃农业大学;2002年
6 杨金水;褐煤降解菌斜卧青霉P6木素过氧化物酶的分离纯化及特性研究[D];中国农业大学;2004年
7 谢家庆;功能配合物及其金属胶束模拟水解酶和过氧化物酶的研究[D];四川大学;2004年
8 蒋细良;中生菌素对水稻主要防御酶的系统诱导[D];中国农业大学;2005年
9 常金华;高粱品种“河农16”抗蚜的理化特性及抗性基因定位[D];河北农业大学;2005年
10 凌云扬;芯片毛细管电泳分析生物样品的应用研究[D];浙江大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙富禅;扫描电化学显微术结合微反应器的单细胞分析[D];山东大学;2006年
2 贾文志;扫描电化学显微镜细胞双信息成像研究[D];山东大学;2005年
3 朱兰兰;扫描电化学显微术检测试剂刺激细胞引起细胞呼吸活性及酶活性的变化[D];山东大学;2005年
4 彭学伟;微反应器的扫描电化学显微术用于生物分子的定量检测[D];山东大学;2005年
5 刘军;国产啤酒大麦中氧化还原酶系的研究[D];江南大学;2005年
6 赵明辉;亚微米电极/微电解池电化学检测单个中性粒细胞中的过氧化物酶[D];山东大学;2005年
7 王翠洁;单细胞释放的活性氧检测及构建细胞传感器检测乳酸盐[D];山东大学;2007年
8 黄海燕;微反应器法纳米粒子的合成及其智能性研究[D];北京化工大学;2002年
9 孔令杰;微反应器的构建及其在有机合成中的应用研究[D];复旦大学;2010年
10 吕晓明;微反应器中快速氧化反应和低温锂卤交换反应研究[D];复旦大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 彭孝军;找准精细化工的创新突破口[N];中国化工报;2007年
2 记者 王燕宁 通讯员 王启兵 傅仓义;“微型化工厂”批量合成纳米材料[N];科技日报;2006年
3 姚耀 丛林 (记者 姚耀);我国微化工技术跻身国际前列[N];中国化工报;2009年
4 悠悠;嚼啊嚼,嚼出长寿来[N];人民政协报;2002年
5 郭宏伟;防衰不妨多鼓“舌”[N];民族医药报;2000年
6 若愚;熟透吃 嚼三十[N];中国医药报;2005年
7 张可喜;日本积极发展“绿色化学”技术[N];中国建设报;2001年
8 胡献国;硒与健康[N];中国中医药报;2000年
9 中国工程院院士、南京工业大学校长 欧阳平凯 教育部超重力工程研究中心主任 陈建峰 北京化工大学教授 陈晓春 中科院大连化物所研究员 陈光文;未来五年,我们的目标是什么[N];中国化工报;2006年
10 王启兵 傅仓义;南工大学生微化工研究有进展[N];中国化工报;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978