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益肾活血汤对大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质表达的影响及其机制研究

张莹  
【摘要】:目的:系膜细胞增殖和细胞外基质积聚是多种肾小球疾病的主要病理特征,抑制系膜细胞增殖和细胞外基质积聚是防治肾小球硬化发生、发展,防治慢性肾衰竭的重要环节。我们在以往的动物实验中证实,中药复方益肾活血汤能够通过抑制TGF-β1、CTGF、PAI-1、PCNA、FN的表达,达到抑制细胞增生及细胞外基质积聚的作用,从而保护肾脏功能,延缓。肾衰竭的进展。本实验将进一步检测含益肾活血汤药物血清对IL-1 β刺激的大鼠肾小球系膜细胞增殖及FN、COLⅣ分泌和p38、α-平滑肌肌动蛋白分子表达的影响,深入探讨益肾活血汤对慢性肾衰竭防治作用的细胞生物学机制。 方法: 1、药物血清的制备:雄性wistar大鼠20只,设立正常对照组和中药组各10只,采用3天灌胃法,末次灌胃后2小时,心脏取血,制备药物血清。 2、分组:正常对照组(正常鼠血清)、IL-1 β刺激组(正常鼠血清+10%IL-1 β)、中药血清组(药物血清+10%IL-1 β)。 3、细胞增殖和细胞周期的检测:应用MTT法检测细胞增殖:流式细胞仪检测细胞周期。 4、细胞外基质的检测:采用双夹心ELISA法检测纤连蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(COL Ⅳ)表达。 5、p38测定:蛋白印记法(Western blot)检测p38磷酸化水平。 6、对细胞表型转化的影响:蛋白印已法(Western blot)检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)。 结果:


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