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人肝癌细胞Fas/FasL途径免疫逃逸机制及其反义寡核苷酸、细胞因子的逆转作用

张娇  
【摘要】:目的:肿瘤的发生和发展与细胞凋亡及机体免疫功能的异常关系密切,通过Fas/FasL系统抵抗Fas介导的凋亡以及反击免疫细胞使T细胞凋亡,是肿瘤细胞免疫逃逸的重要机制之一。本课题通过对肝癌细胞株HepG2.2.15的Fas、FasL及其功能的检测,探讨肝癌细胞通过Fas/FasL途径的免疫逃逸机制;并通过分析肝癌组织细胞Fas-670位点基因多态性,探究肝癌细胞Fas表达低下的原因;通过将FasL反义寡脱氧核苷酸(ASODN)转染入肝癌细胞及将Fas ASODN转染T细胞,研究Fas、FasL ASODN抑制肝癌细胞诱导的T细胞凋亡,逆转肝癌细胞免疫逃逸的作用机制;通过干扰素-α上调肝癌细胞Fas表达,研究细胞因子对肿瘤细胞凋亡的促进作用。 方法:(1)流式细胞术(FCM)检测肝癌细胞HepG2.2.15表面Fas及FasL的表达;(2)用激活性Fas单抗CH11诱导细胞凋亡的方法研究肝癌细胞对Fas介导凋亡的抵抗;(3)用HepG2.2.15细胞与Jurkat细胞共培养法研究肝癌细胞表面FasL诱导T细胞凋亡的机制。(4)用PCR-RFLP法分析肝癌组织细胞Fas-670位点的基因多态性。(5)根据Fas及FasL基因序列设计合成特异的互补于mRNA起始密码区的Fas及FasL ASODN,并设同长度的与mRNA起始密码区序列相同的正义寡脱氧核苷酸(SODN)做对照,均经硫代磷酸化修饰。根据预实验结果,选择120nmol/L、200nmol/L、280nmol/L为转染液的终浓度,通过脂质体介导法转导


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