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BMP-2基因转染ADSCs复合CTCP成骨及修复颌骨缺损的实验研究

郑培惠  
【摘要】:目的 1、探索SD大鼠脂肪组织来源干细胞(adipose derived stem cells,ADSCs)的体外培养方法,观察其体外增殖能力及生物学特性,对细胞表面干细胞相关标志进行鉴定,为脂肪干细胞的进一步研究奠定基础。 2、对原代及第3代ADSCs向脂肪细胞、成骨细胞、成脂肪细胞定向诱导,观察其多向分化潜能,并探讨其体外成骨能力,为ADSCs作为骨组织工程种子细胞提供理论依据。 3、扩增、纯化本实验室所构建的含重组人骨形态发生蛋白-2(human bone morphogenetic protein,hBMP-2)基因和含绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的重组腺病毒表达载体(Ad-hBMP-2,Ad-GFP),并测定其滴度;研究ADSCs经基因转染后生物学行为的变化和目的基因的表达,应用Ad-GFP转染细胞,测定腺病毒转染效率。 4、探索以Ad-BMP-2转染的ADSCs作种子细胞,并以壳聚糖—磷酸三钙(CTCP)为支架材料,构建组织工程化骨的可行性,观察在无免疫力的裸鼠体内成骨情况,和在有免疫力的SD大鼠体内修复下颌骨缺损的效果。 方法 1、从3周龄SD大鼠腹股沟脂肪垫分离出脂肪组织,通过Ⅰ型胶原酶消化法获取原代ADSCs,适时传代。逐日倒置显微镜观察细胞形态及生长特征;研究其增殖过程,MTT法绘制出生长曲线;采用免疫组化、免疫荧光流式细胞术对细


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