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滤纸干血片中AFP及游离β-hCG检测方法的建立及在唐氏综合征产前复查中的应用研究

张莉  
【摘要】: 目的:建立一种检测滤纸干血片中AFP及游离β-hCG含量的方法,探讨该方法用于DS的产前筛查的可行性。 方法:首先建立妊娠中期滤纸干血片法检测血液中AFP及游离β-hCG含量的实验方法:通过对血片中血清含量的计算来决定所用血片的大小;通过对血片的不同洗脱时间对结果的影响、滤纸片和红细胞对抗原抗体的结合的影响、滤纸片和红细胞对示踪液的影响等的研究,摸索出滤纸干血片中用时间分辨免疫荧光法(DELFIA)检测AFP及游离β-hCG的最佳实验操作流程,并对建立的新方法进行不精密度、不准确度、稳定性等性能评估,得出实验方法可行性的结论。首先对血片的稳定性进行了评估,即检测不同温度(4℃和-20℃),不同保存时间(3个月和当天)等条件下滤纸干血片中AFP及游离β-hCG含量,并与相应条件下检测的血清中AFP及游离β-hCG含量进行对比,血片中分析物的浓度与血清中分析物浓度相关作为滤纸干血片法可用于产前筛查的依据之一。随后用新建立的实验方法检测1320例孕中期不同孕周(15~20周)孕妇滤纸干血片中AFP及游离β-hCG含量,分别统计出各孕周的中位数值,由此计算出每例孕妇血液中AFP及游离β-hCG的中倍数值(MoM值),结合孕妇自身年龄、孕周、体重等因素通过专用筛查软件对胎儿进行DS发病风险的估计,以血清筛查得出的DS发病高风险率(72/1320)作为确定滤纸干血片方法筛查阳性切值的依据,得出血片法筛查阳性的切值,并与相应的血清标本进行对比研究。以血清法作为DS筛查的金标准,滤纸干血片法与之进行比较,计算滤纸干血片法筛查的特异性、敏感性、Youden指数和准确度。 结果:建立了滤纸干血片中AFP及游离β-hCG的检测方法,检测AFP水平的批内不精密度及天间不精密度分别为4.1%和5.2%,回收率为95.1%。滤纸干血片法检测游离β-hCG水平的批内及天间不精密度分别为5.0%和5.8%,回收率为97.6%。滤纸干血片在4℃和-20℃条件下保存一个月与采集血液的当天比较,血片中标记物浓度变化无统计学意义,AFP及游离β-hCG含量在血片与血清间的相关系数分别为0.997、0.999。1320例孕妇经滤纸干血片法进行的胎儿DS筛查结果与血清法比较,差别无统计学意义。以血清法作为唐氏筛查的金标准,对滤纸干血片法应用于DS产前筛查进行评价,其敏感度94.5%,特异度99.7%,Youden指数94.2%,准确度99.4%。 结论:我们成功建立了一种滤纸干血片中AFP及游离β-hCG含量的检测方法,AFP及游离β-hCG含量在滤纸干血片中稳定性好,检测准确度、精密度均较高。用于DS产前筛查的结果与血清法筛查结果相比符合性好,可以用于妊娠中期DS的产前筛查。


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