济南地区异质性万古霉素中介金葡萄的分离率及方法研究

【摘要】： 研究背景： 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRS A)仍然是临床上感染性疾病致病率和病死率较高的主要原因,以万古霉素为代表的糖肽类抗生素是各种指南所推荐的治疗这类细菌感染的最有效药物之一。近年来临床万古霉素治疗失败的病例逐年增多,在世界范围内,引起了对万古霉素为代表的糖肽类抗生素耐药问题的关注。为此,2006年CLSI (the clinical and laboratory standards institute,原NCCLS)修正了金葡菌对万古霉素的敏感性和抗性临界值,即万古霉素敏感菌的MIC由原来的4μg／ml改为2μg／ml,万古霉素中介菌的MIC由先前的8-16μg/ml改为4-8μg／ml。根据这一新的规定,可以将MRSA对万古霉素的耐药程度分为两个水平：一种为高水平耐药的VRSA (vancomycin-resistant staphylococcus aureus),其万古霉素MIC≥16μg/ml；另一种则为低水平耐药的hVISA (heterogeneous vancomycin intermediate resistant staphylococcus aureus)和VISA (vancomycin intermediate resistant staphyl-ococcus areus),其中VISA的MIC介于4-8μg／ml,而hVISA的情况较为特殊,目前报告多数hVISA的万古霉素MIC介于1～4μg/ml,但是它们可以在含有万古霉素的平皿上以10-6的频率产生万古霉素MIC水平在中介范围的亚克隆(subclone),这也是将之定义为“异质性”的由来。事实表明,对万古霉素异质性耐药的金葡菌(hVISA)远远多于耐药／中介的金葡菌(VRSA/VISA),因此近年来hVISA的研究成为医学上的热点。迄今为止,济南地区的异质性万古霉素中介金葡菌(hVISA)的分离率尚无报道；在新标准下,尚无一种简单易行且具有高度敏感性和特异性的方法以供临床常规进行hVISA的筛选。研究目的： (1)了解济南地区临床分离的MRSA标本中异质性万古霉素中介金葡菌(hVISA)的分离率。 (2)对2ug／ml万古霉素(BHIV2)、4ug/ml万古霉素(BHIV4)及5ug／ml替考拉宁(BHIT5)脑心浸液琼脂筛选法初筛的三种筛选方法进行评价。研究对象与方法： (1)对收集于济南地区6家三甲医院的216株临床分离的耐甲氧西林金葡菌(MRSA)分别进行2ug／ml万古霉素(BHIV2)、4ug/ml万古霉素(BHIV4)及5ug／ml替考拉宁(BHIT5)脑心浸液琼脂筛选法初筛。 (2)对琼脂筛选法初筛的阳性菌株进行macroEtest (MET)法进一步筛选。 (3)对macroEtest (MET)法筛选的阳性菌株用改良菌群分析策略-曲线下面积法(PAP-AUC)进行确认。 结果： (1) BHIV2、BHIV4、BHIT5筛选法初筛的菌株数分别为：143株、19株、110株。 (2)初筛的阳性菌株经macroEtest (MET)法进一步筛选阳性菌株分别为：32株、16株、29株。 (3)macroEtest(MET)法筛选的阳性菌株,经改良菌群分析策略-曲线下面积法(PAP-AUC)最终确认菌株分别为：23株、14株、21株。 (4)三种方法筛选的阳性菌株,减去重复菌株,最终确认为hVISA的为29株；则济南地区hVISA的分离率至少为13.4%(29／216)。 结论： (1)通过三种筛选方法,hVISA在本地区临床分离的MRSA菌株都有一定的分离率,这可能是临床万古霉素治疗失败的原因之一。 (2)三种方法中BHIV2、BHIT5筛选法敏感性无差异,均高于BHIV4筛选法；BHIV2、BHIT5筛选法特异性亦无差异,BHIV4筛选法特异性高于BHIV2、BHIT5筛选法。