Survivin反义寡核苷酸转染对肝门部胆管癌细胞株FRH-0201侵袭作用的实验研究

【摘要】： 目的： 通过采用脂质体瞬时转染反义寡核苷酸技术封闭凋亡抑制基因Survivin在肝门部胆管癌细胞株FRH-0201中的表达,观察对胆管癌细胞增殖及凋亡的影响,并通过细胞外分泌酶测定及细胞侵袭实验研究该细胞株实验前后侵袭能力的变化。探讨以该基因为靶点对于肝门部胆管癌的治疗意义及前景。 方法： 针对Survivin基因序列软件设计并合成反义寡核苷酸,全程硫代修饰,采用阳离子脂质体包裹转染方法转染肝门部胆管癌细胞株FRH-0201。首先分时段观察细胞形态及细胞增殖凋亡情况,记录与正常培养组差异。第二步设置正义转染组,反义转染组及空白对照组,取细胞上清培养液,离心后行酶联免疫吸附实验,观测各实验组MMP-2、TIMP-2的含量变化。第三步取各组细胞进行细胞侵袭实验,观察细胞侵袭能力的变化。所有数据采用SAS9.1统计软件包进行分析,计量资料以x±s表示。 结果： 1、Survivin反义寡核苷酸转染对胆管癌细胞凋亡作用的影响：Survivin反义转染组细胞失去正常梭形样细胞形态,胞体缩小呈近圆或椭圆形,胞浆减少,胞核深染,细胞核呈凋亡样变化,可见核碎裂像,细胞间隙增大,贴壁性差,部分脱落于培养基中悬浮。正义转染组细胞形态与空白对照组细胞生长良好,形态狭长,轮廓清晰,胞核呈2-3个核仁表现。增殖情况优秀,传代及贴壁生长情况好。 2、酶联免疫吸附试验检测细胞上清液MMP-2、TIMP-2:反义转染组上清液MMP-2含量较正义转染组及空白对照组明显减少(61.32±2.21vs94.15±3.32；61.32±2.21vs100.45±5.86,P0.05)；而反义转染组上清液TIMP-2含量较正义转染组及空白对照组明显增多(95.01±1.36vs58.21±4.42；95.01±1.36vs60.92±5.47,P0.05)。 3、肿瘤细胞侵袭实验结果：随机选取五个视野观察胆管癌细胞,并计数穿过聚碳酸酯膜的细胞数目,空白对照组(46.33±3.51)正义转染组(43.67±2.08),反义转染组(21.33±4.16),反义转染组穿过细胞数较空白组及正义转染组少(P0.05),空白组及正义转染组细胞数目无统计学差异(P0.05)。 结论： 1、Survivin反义寡核苷酸转染可有效抑制肝门部胆管癌细胞增殖,诱导细 胞凋亡； 2、Survivin反义寡核苷酸转染能显著降低胆管癌细胞的侵袭能力。