收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino.)L-古洛糖酸-1,4-内酯氧化酶(GLO)的研究

王嘉  
【摘要】: 本论文首先介绍了脊椎动物维生素C合成关键酶——L-古洛糖酸-1,4-内酯氧化酶(GLO)研究进展,包括脊椎动物中GLO的性质,影响脊椎动物GLO活性的因素,GLO在脊椎动物中的存在、分布以及与脊椎动物进化的关系。然后,通过分子生物学手段,围绕皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino.)是否具有GLO活性,是否具有VC合成能力这一主题进行了研究。主要研究内容包括:(1)皱纹盘鲍GLO基因的克隆和组织及不同发育阶段的表达;(2)饲料维生素C对皱纹盘鲍成鲍生长、各组织抗坏血酸含量以及GLO mRNA表达量的影响;(3)皱纹盘鲍VC缺乏条件下肝胰腺和肾脏差异表达cDNA文库的构建。研究结果总结如下: (1)皱纹盘鲍GLO基因的克隆和组织及不同发育阶段的表达。配制VC0.0 mg/kg的精制饲料,在室内流水养殖系统中,投喂初重为74.32±0.43 g,初始壳长为84.36±0.24 mm的皱纹盘鲍成鲍,养殖周期170天。以肾脏组织mRNA为模板,通过简并引物PCR法克隆GLO核心片段,通过RACE法调取基因全长。通过特异引物PCR和荧光实时定量PCR法确定皱纹盘鲍不同组织和不同发育阶段的表达。结果如下:获得了皱纹盘鲍GLO cDNA全长序列,包括1606个核苷酸,其中开放阅读框包括1365个核苷酸,编码一个由454个氨基酸组成的蛋白质,其氨基酸序列与脊椎动物的GLO序列有很高的同源性(48%),确定其为皱纹盘鲍GLO基因;GLO mRNA在包括肝胰腺、肾脏、外套膜、肌肉、鳃和血细胞等6个组织中都有表达;GLO mRNA在从担轮幼虫到幼鲍的7个发育阶段都有表达,并且相对表达量在上足分化幼虫中达到最高,呈现随幼体发育先升高后下降的趋势。本研究在国际上首次从无脊椎动物中克隆到GLO全长序列,证明皱纹盘鲍具有VC合成能力。 (2)饲料维生素C对皱纹盘鲍成鲍生长、各组织抗坏血酸含量以及GLOmRNA表达量的影响。配制VC0.0,70.3,829.8和4967.5 mg/kg的共4个水平的精制饲料,在室内流水养殖系统中,投喂初重为74.32±0.43 g,初始壳长为84.36±0.24 mm的皱纹盘鲍成鲍,养殖周期170天。结果表明,饲料中不同VC含量对皱纹盘鲍成鲍的存活率,增重率,贝壳日增长率等生长指标没有显著影响(p0.05)。皱纹盘鲍不同组织间抗坏血酸含量存在极显著差异(p0.01),鳃在各处理组均极显著的高于其他各组织(p0.01);而血清除在70.3mg/kg处理组显著低于外套膜(p0.05)外,其他均极显著的低于其他组织(p0.01);总体而言,皱纹盘鲍组织抗坏血酸含量为鳃肾脏、肝胰腺外套膜、肌肉血清。饲料中不同添加水平的维生素C对皱纹盘鲍各个组织抗坏血酸含量产生不同的影响,对肾脏、外套膜、鳃和血清抗坏血酸含量没有显著影响(p0.05);而对肌肉和肝胰腺抗坏血酸含量产生显著影响(p0.05):当饲料中维生素C含量达到4967.5 mg/kg时,肌肉中的抗坏血酸含量极显著的高于0.0 mg/kg处理组(p0.01),显著高于829.8 mg/kg处理组(p0.05);肝胰腺中的抗坏血酸含量显著高于0.0 mg/kg处理组(p0.05)。不同组织中两种看家基因β-actin和核糖体蛋白S9 mRNA的表达量均存在极显著差异(p0.01),总体而言,β-actin mRNA的表达量血细胞鳃、肌肉、外套膜、肾脏肝胰腺;核糖体蛋白S9 mRNA的表达量鳃血细胞、外套膜、肾脏、肝胰腺肌肉。不同饲料维生素C对皱纹盘鲍β-actin mRNA的表达量在肝胰腺、肾脏、肌肉和外套膜中不受饲料维生素C含量的影响(p0.05),但在鳃和血细胞中受饲料维生素C含量的影响(p0.05);核糖体蛋白S9 mRNA的表达量在肝胰腺、肾脏、肌肉、外套膜和鳃中均无显著影响(p0.05)。以核糖体蛋白S9为内参基因时,饲料维生素C对各组织中GLOmRNA相对表达量均没有影响(p0.05);以β-actin为内参基因时,除鳃之外的其他各组织中GLO mRNA相对表达量均不受饲料维生素C的影响(p0.05);在鳃中,O.Omg/kg处理组显著高于829.8mg/kg处理组(p0.05)。各组织间GLOmRNA相对表达量存在极显著差异(p0.01),总体而言,GLO mRNA相对表达量肾脏鳃血细胞、外套膜、肝胰腺肌肉。 (3)皱纹盘鲍VC缺乏条件下肝胰腺和肾脏差异表达cDNA文库的构建。配制了维生素C缺乏(0 mg/kg)和正常(4967.5 mg/kg)2个水平的精制饲料,在室内流水养殖系统中,投喂初重为74.32±0.43 g,初始壳长为84.36±0.24 mm的皱纹盘鲍成鲍,养殖周期170天。采用抑制消减杂交法(suppression subtractive hybridization, SSH),构建了维生素C缺乏条件下肝胰腺和肾脏组织差异表达cDNA文库。消减杂交效率分析显示,构建的2个差异表达cDNA文库中差异表达的基因分别至少被富集了25和25-10倍。从文库中随机挑选阳性克隆测序。在肝胰腺差异表达cDNA文库中,获得了63个基因片段。在肾脏差异表达cDNA文库中,获得了39个基因片段。这些片段有可能为VC缺乏条件下差异表达的基因,这些片段的获得为进一步从分子水平研究皱纹盘鲍VC代谢机理奠定基础。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 童圣英,赵艳,李宏,王子臣;几种常用中草药对皱纹盘鲍摄食行为的影响[J];大连水产学院学报;1998年04期
2 周小文;;贝类养殖技术之五 南方地区皱纹盘鲍育苗技术[J];中国水产;2006年12期
3 王春生;皱纹盘鲍立体高密度养殖技术[J];科技信息;1999年05期
4 王伟定,于谨兰,姚海富,许文军;皱纹盘鲍大规格苗种培育工艺流程和技术要点[J];上海水产大学学报;2001年02期
5 桂英爱,王洪军;碘伏对皱纹盘鲍的急性毒性试验[J];水产科学;2002年02期
6 陈炜,孟宪治,陶平;2种壳色皱纹盘鲍营养成分的比较[J];中国水产科学;2004年04期
7 欧俊新;皱纹盘鲍海区筏式吊养[J];水产科技情报;2001年05期
8 何华武;林焕阳;王振华;林进发;谢耀光;;盘鲍和皱纹盘鲍的杂交育苗技术[J];福建水产;2007年02期
9 李雪容;;皱纹盘鲍海上挂笼养殖试验[J];科学养鱼;2007年09期
10 陈炳能,谢开恩,卢豪魁,陈世杰,陈木;皱纹盘鲍南移的初步研究[J];动物学报;1977年01期
11 孙振兴,李诺,宋志乐,赵玉山,关向华;皱纹盘鲍三倍体诱导条件及其室内饲育试验[J];水产学报;1993年03期
12 张志峰,茅云翔,潘洁,汪小龙,包振民;皱纹盘鲍肌动蛋白基因启动子的克隆和序列分析[J];水产学报;2001年05期
13 杜贞玺,胡明,安传林,吴廷山,黄鑫;鲍鱼养殖技术之一 皱纹盘鲍网箱养殖技术[J];中国水产;2005年02期
14 刁延荣;颜红妮;;皱纹盘鲍杂交育苗技术研究[J];齐鲁渔业;2007年10期
15 刘晓,张国范,赵洪恩;皱纹盘鲍“中国红”品系的选育[J];动物学杂志;2003年04期
16 刘慧慧,李太武,苏秀榕;试述皱纹盘鲍的受精作用及其精卵结合机制[J];河北渔业;2003年05期
17 杜贞玺,胡明,安传林,吴廷山,黄鑫;皱纹盘鲍健康养殖技术[J];齐鲁渔业;2005年11期
18 刘永襄,高绪生,刘永峰;皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino)亲鲍室内人工促熟培育的初步试验[J];水产科学;1982年01期
19 冯月群;;“皱纹盘鲍新麻醉剂FQ—420应用技术研究”通过鉴定[J];海洋渔业;1992年03期
20 崔龙波,陆瑶华;皱纹盘鲍心脏、肾脏、粘液腺和足的组织学研究[J];齐鲁渔业;1997年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 宋振荣;陈月忠;黄健;杨小强;任保卫;;南方海域养殖皱纹盘鲍高温期死亡原因分析[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会论文摘要汇编[C];2009年
2 张丽博;李加琦;匡友谊;刘晓;孙效文;;皱纹盘鲍微卫星标记开发和4个群体的遗传多样性分析[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会论文摘要汇编[C];2009年
3 常亚青;许淑芬;张剑成;谭永凯;刘明泰;;皱纹盘鲍原种家系的建立及其生长发育的研究[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会论文摘要汇编[C];2009年
4 王竹清;李平林;李八方;;皱纹盘鲍性腺脂质成分分析[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
5 丁鉴锋;张国范;;皱纹盘鲍(Haliotis discus Hannai)C型溶菌酶基因研究[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会论文摘要汇编[C];2009年
6 程培周;刘晓;张国范;;皱纹盘鲍HSP70的克隆与表达[A];中国海洋湖沼学会中国动物学会贝类学分会第十二次学术讨论会摘要[C];2005年
7 李琪;;皱纹盘鲍微卫星研究进展[A];贝类学会第七次会员代表大会暨第十一次学术讨论会摘要[C];2003年
8 李加琦;王轲;孙辉;何庆国;徐步金;刘晓;;皱纹盘鲍2个选育系间群体交配苗种的温度耐受性评价[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会论文摘要汇编[C];2009年
9 张振;徐步金;李卫巍;田乐;卢传奇;孙辉;何庆国;王劭雯;刘晓;;皱纹盘鲍微卫星标记开发和遗传连锁图谱构建[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会论文摘要汇编[C];2009年
10 刘晓;张国范;赵洪恩;;皱纹盘鲍“中国红”品系的选育[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学分会第十次学术讨论会论文集[C];2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李加琦;皱纹盘鲍配套杂交体系的建立、评价及应用[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2011年
2 李明珠;皱纹盘鲍Δ5脂肪酸去饱和酶研究[D];中国海洋大学;2013年
3 邓岳文;皱纹盘鲍数量遗传与育种研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2005年
4 王嘉;皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino.)L-古洛糖酸-1,4-内酯氧化酶(GLO)的研究[D];中国海洋大学;2010年
5 陈宏;B族维生素影响皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino)主要营养物质代谢机理的研究[D];中国海洋大学;2004年
6 张振;基于微卫星和SNP标记的皱纹盘鲍遗传连锁图谱及其应用[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2010年
7 洪旭光;皱纹盘鲍和栉孔扇贝抗菌肽的研究[D];中国海洋大学;2008年
8 张文兵;皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino.)贝壳生物矿化的营养学机理初探[D];青岛海洋大学;2002年
9 亓海刚;皱纹盘鲍基因组单核苷酸多态标记开发与应用[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2009年
10 程培周;皱纹盘鲍热休克蛋白70基因的克隆、表达及应用[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 何庆国;皱纹盘鲍4种多糖裂解基因的表达研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2011年
2 房沙沙;中国南海养殖区分离的两株弧菌对皱纹盘鲍致病性的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2013年
3 刘艳青;皱纹盘鲍地域及季节性差异分析及内脏磷脂减肥活性研究[D];中国海洋大学;2013年
4 郭战胜;皱纹盘鲍与黑足鲍杂交育苗研究[D];山东大学;2014年
5 吴茂生;福州市皱纹盘鲍养殖病害调查研究[D];集美大学;2011年
6 姜海峰;皱纹盘鲍肠道益生菌的筛选与应用研究[D];西北农林科技大学;2012年
7 陈齐勇;饲料中α-硫辛酸、谷胱甘肽和硒对皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino)生长和抗氧化反应的影响[D];中国海洋大学;2010年
8 沈建东;皱纹盘鲍组织蛋白酶L的分离纯化、性质分析及分子克隆[D];集美大学;2013年
9 李明珠;皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino.)△6脂肪酸去饱和酶(△6FAD)基因克隆以及不同脂肪源对皱纹盘鲍稚鲍生长、脂肪酸组成和△6FAD表达的影响[D];中国海洋大学;2010年
10 万敏;皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino)营养免疫学初步研究[D];中国海洋大学;2003年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 张自然;皱纹盘鲍杂交新品系长速快 品质优[N];中国渔业报;2004年
2 于美志;“皱纹盘鲍杂交育种技术”缩短了养成周期[N];中国渔业报;2010年
3 黄喜祖;东山成功育成皱纹盘鲍与黑鲍二代苗[N];中国渔业报;2005年
4 于险峰张仁军;獐子岛养殖技术项目获国家科技进步奖[N];农民日报;2008年
5 申吉忠通讯员 陈悦 李昌 美丽;长岛鲍鱼海胆享受“国家级保护”[N];烟台日报;2008年
6 宋学智;鲍鱼养殖形成大产业[N];青岛日报;2006年
7 王家怿 孙卫锋;鲍鱼也迁徙,2600万粒鲍鱼北上“避暑”[N];新华每日电讯;2006年
8 王京宝;我国海珍品养殖现状分析[N];中国渔业报;2006年
9 范垂声 本报记者 金春华;与海洋生命共舞[N];辽宁日报;2001年
10 黄枫 戴艳梅 郑伟伟;泉港惠屿:孤岛不“孤”[N];福建日报;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978