收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

哈维氏弧菌外膜蛋白基因ompU的克隆表达、DNA疫苗构建及对大菱鲆免疫效果探究

王晴  
【摘要】:哈维氏弧菌是一种革兰氏阴性菌,被认为是引起发光弧菌病的主要病原性弧菌。发光性弧菌病已经影响到大范围的海洋无脊椎动物,已有报道称很多国家养殖对虾的大量死亡是受到了哈维氏弧菌的感染引起的。哈维氏弧菌也与中国和南亚各国的鱼类细菌性疾病有关,其广泛的致病性和给水产养殖业造成的严重影响引起了世界范围的广泛关注。 本研究的主要目的是从致病性哈维氏弧菌SF-1中克隆和表达一种外膜蛋白OmpU,探究其作为疫苗候选基因在大菱鲆对抗哈维氏弧菌感染时的免疫效果。 在本实验中,一种外膜蛋白基因ompU从致病性哈维氏弧菌SF-1基因组中克隆,并在大肠杆菌原核表达系统中得到表达。ompU基因编码一个35kDa的蛋白,此蛋白可以通过Ni亲和柱亲和层析的方法得到纯化。将ompU基因插入到真核表达质粒载体pEGFP-N1中,制备成DNA疫苗。通过RT-PCR检测证实pEGFP-N1/ompU可以在大菱鲆肌肉组织内得到表达。纯化的外膜蛋白OmpU和重组质粒pEGFP-N1/ompU通过肌肉注射的方式分别对大菱鲆进行免疫,实验结果显示,OmpU蛋白疫苗在对抗致病性哈维氏弧菌SF-1中可以达到很好的保护效果,实验组大菱鲆在攻毒试验中的免疫保护率达到100%, DNA疫苗pEGFP-N1/ompU免疫组大菱鲆也起到了很好的保护效果,免疫保护率达到51.4%。通过间接ELISA可以检测到免疫组大菱鲆体内的特异性抗体反应。 综上所述,我们从致病性哈维氏弧菌SF-1基因组中克隆和表达了一种外膜蛋白基因ompU,此蛋白被用于制作亚单位疫苗,重组质粒pEGFP-N1/ompU的DNA疫苗也被构建和在体内表达,对于免疫过的实验组大菱鲆来讲,无论是蛋白疫苗还是基因疫苗,在对哈维氏弧菌的感染中均可以起到较高水平的保护,引起显著的特异性抗体免疫。实验结果显示,ompU基因被认为是一种有效的疫苗候选基因,可用于研制亚单位疫苗和DNA疫苗预防由致病性哈维氏弧菌引起的鱼类养殖类疾病。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 成凯;谢丽玲;赵水灵;梁剑勇;刘向云;;黄芩对7种水产动物病原菌的体外抑菌活性研究[J];水产科学;2011年07期
2 徐长安;罗秀针;俞超超;;海洋源生防细菌LHB02的筛选、鉴定及其抑菌谱检测[J];海洋与湖沼;2011年02期
3 米娜莎;王栋;;中国大菱鲆产业现状及发展趋势分析[J];海洋科学;2011年06期
4 李昕;田由甲;郭春山;张丽;;大菱鲆皮肤囊肿病的几种治疗方法[J];河北渔业;2011年09期
5 何伟杰;蔡俊鹏;;蛭弧菌在大菱鲆养成中的应用研究[J];安徽农业科学;2011年14期
6 梁俊平;李健;常志强;韩现芹;赵法箴;;达氟沙星在健康大菱鲆体内的药代动力学研究[J];渔业科学进展;2011年03期
7 张丽;王菁;窦华杰;马文婷;杨凯;李军;冯守明;孙志景;;大菱鲆迟缓爱德华氏菌福尔马林灭活疫苗研究[J];水产养殖;2011年07期
8 林春媛;刘志伟;王印庚;李强;张正;王庚申;;网箱养殖许氏平鲉疾病的国内外研究进展[J];河北渔业;2011年08期
9 ;大菱鲆“丹法鲆”[J];科技致富向导;2011年19期
10 黄书培;杨正勇;;不同养殖规模下大菱鲆工厂化养殖经济效益分析[J];广东农业科学;2011年16期
11 王新安;马爱军;雷霁霖;杨志;曲江波;黄智慧;薛宝贵;;大菱鲆不同家系生长性能的比较[J];海洋科学;2011年04期
12 崔丽卿;徐玮;汪东风;;稀土对大菱鲆生长和非特异性免疫力的影响[J];中国海洋大学学报(自然科学版);2011年Z2期
13 王印庚;刘志伟;林春媛;陈霞;王玲;李华;;养殖大菱鲆隐核虫病及其治疗[J];水产学报;2011年07期
14 王秀华;周凌云;王玉娟;刘琴;;多效价载体疫苗免疫大菱鲆效果评价[J];中国水产科学;2011年04期
15 王新安;马爱军;黄智慧;刘庆明;郭黎;杨志;曲江波;;大菱鲆(Scophthalmus maximus)大规模家系选育优良家系的生长发育规律[J];海洋与湖沼;2011年02期
16 朱建新;赵霞;曲克明;高淳仁;李贤;刘鹰;;封闭循环水系统中养殖密度对大菱鲆生长和免疫的影响[J];渔业现代化;2011年04期
17 刘兴旺;麦康森;艾庆辉;;鲆鲽鱼营养生理研究进展[J];中国饲料;2011年14期
18 刘丽;;利用生物海水净化养殖大菱鲆试验[J];黑龙江水产;2011年04期
19 于慧娟;钱蓓蕾;黄冬梅;苏惠;顾润润;冯兵;;液相色谱串联质谱法测定大菱鲆和鳜鱼体中地西泮及其代谢物残留的研究[J];中国渔业质量与标准;2011年01期
20 潘漫;盛园园;孙丽;赵前程;张崇禧;;中草药提取物对常见食源性致病菌的体外抑菌试验[J];中国兽医杂志;2011年08期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 徐芝亮;吴灶和;简纪常;;哈维氏弧菌遗传多样性的研究[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
2 覃映雪;李海平;鄢庆枇;;理化因子对哈维氏弧菌生物被膜形成的影响[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
3 施慧;许文军;谢建军;查智辉;徐汉祥;史海东;;曼氏无针乌贼溃疡病病原菌哈维氏弧菌的分离与鉴定[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
4 陈雅芳;覃映雪;苏永全;王世锋;;哈维氏弧菌胞外产物的研究[A];中国海洋湖沼学会鱼类学分会、中国动物学会鱼类学分会2004年学术研讨会摘要汇编[C];2004年
5 徐敏;王静;薛斐;牟海津;;海洋细菌细胞脂肪酸组成的研究[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
6 覃映雪;苏永全;王德祥;鄢庆枇;;哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)TS-628菌株外膜蛋白、鞭毛蛋白及脂多糖的免疫原性研究[A];中国海洋湖沼学会鱼类学分会、中国动物学会鱼类学分会2004年学术研讨会摘要汇编[C];2004年
7 郝贵杰;沈锦玉;潘晓艺;尹文林;曹铮;;哈维氏弧菌GYC1108-1胞外蛋白酶的制备及免疫原性研究[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会(第三卷)[C];2010年
8 张崇文;于涟;毛芝娟;;大黄鱼哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK基因的克隆与序列分析[A];浙江省免疫学会第五次学术研讨会论文汇编[C];2004年
9 操玉涛;吴灶和;简纪常;;环介导等温扩增法快速检测哈维氏弧菌的研究[A];2008年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2008年
10 耿玉静;王瑞旋;王江勇;冯涓;姜敬哲;;哈维氏弧菌耐药基因SulⅡ的克隆及原核表达[A];2009年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 白方方;哈维氏弧菌VHH溶血素对牙鲆组织细胞的侵染作用及诱导细胞凋亡作用研究[D];中国海洋大学;2010年
2 刘瑞;副溶血弧菌丝氨酸蛋白酶及溶血素的表达、纯化、定点突变及弧菌多联DNA疫苗的研制[D];中国海洋大学;2011年
3 孙铂光;哈维氏弧菌VHH溶血素作用机理的研究[D];中国海洋大学;2009年
4 贾爱荣;大菱鲆4种免疫相关基因的克隆、表达分析及溶藻弧菌溶血素的研究[D];中国海洋大学;2010年
5 张崇文;哈维氏弧菌外膜蛋白(OmpK和GAPDH)免疫原性研究及主要海水病原弧菌外膜蛋白交叉保护性抗原筛选[D];浙江大学;2007年
6 金光;海洋拮抗菌JG1的分离鉴定、应用及热激蛋白DnaK的保护机制初探[D];中国海洋大学;2010年
7 史成银;我国养殖大菱鲆病毒性红体病的研究[D];中国海洋大学;2004年
8 佟雪红;大菱鲆早期发育及其相关生理特性研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2010年
9 刘兴旺;大菱鲆及半滑舌鳎蛋白质营养生理研究[D];中国海洋大学;2010年
10 张卫卫;弧菌琼胶酶和丝氨酸蛋白酶的筛选、分析以及免疫应用[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王晴;哈维氏弧菌外膜蛋白基因ompU的克隆表达、DNA疫苗构建及对大菱鲆免疫效果探究[D];中国海洋大学;2011年
2 陶然;哈维氏弧菌硫氧还蛋白还原酶在大肠杆菌中的表达及对大菱鲆免疫保护作用[D];中国海洋大学;2011年
3 刘力铭;哈维氏弧菌运动相关基因功能研究[D];集美大学;2010年
4 颜显辉;大菱鲆病原菌的鉴定及哈维氏弧菌溶血素的克隆[D];中国海洋大学;2004年
5 姜荧安;荧光定量PCR检测哈维氏弧菌活的非可培养状态过程中的基因表达[D];中国海洋大学;2010年
6 张静;网箱鲈鱼内脏白点病病原鉴定及两种快速检测方法的建立[D];浙江海洋学院;2010年
7 王传娟;大菱鲆受哈维氏弧菌感染后的基因差异表达研究[D];中国海洋大学;2007年
8 苏杭;养殖凡纳滨对虾病原菌(哈维氏弧菌)的分离鉴定与防治[D];四川农业大学;2010年
9 庞玲玲;哈维氏弧菌毒力相关基因的筛查及快速检测技术研究[D];中国海洋大学;2007年
10 陈雅芳;哈维氏弧菌胞外产物及鞭毛蛋白的研究[D];厦门大学;2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 董玉增 李立刚;大菱鲆鱼细菌性败血症的防治(未完待续)[N];中国海洋报;2001年
2 董玉增 李立刚;大菱鲆鱼细菌性败血症的防治[N];中国海洋报;2001年
3 林彬;大菱鲆常见寄生虫病的防治[N];江苏农业科技报;2005年
4 周里;兴城成立国家大菱鲆良种场[N];辽宁日报;2008年
5 黄海所鱼类室;大菱鲆养殖有望实现全程封闭[N];中国渔业报;2010年
6 陆荣宝;教授帮我养大菱鲆[N];科技日报;2003年
7 山东省莱州市水产局 穆俊山 李国江 马家强;如何配制大菱鲆饲料[N];中国海洋报;2002年
8 杜佳垠;大菱鲆常见传染性疾病[N];中国畜牧水产报;2000年
9 ;大菱鲆的养殖技术[N];江苏科技报;2004年
10 本报记者  冯华;大洋里“游”来多宝鱼[N];人民日报;2006年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978