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南极磷虾磷脂提取纯化及抗衰老实验研究

赵静  
【摘要】:南极磷虾是生活在南大洋数量丰富的海洋甲壳动物,主要有7-8种,我们平时所说的南极磷虾主要指南极大磷虾。南极磷虾中含有丰富的磷脂资源,是磷脂的生物富集库,南极磷虾磷脂中含有大量的多不饱和脂肪酸,能够防氧化延缓衰老,保护肝脏,减轻体内过氧化物堆积和对身体的伤害。目前对于南极磷虾磷脂资源的开发和研究仍然相对薄弱,因此实验室条件下积极地探索南极磷虾磷脂的加工工艺和生理功能实验分析,对我国南极磷虾磷脂资源的产业开发提供技术思路和理论依据,具有重要的理论和经济价值。 本研究首先摸索适合南极磷虾磷脂提取的有机溶剂萃取条件,制备高纯度的南极磷虾磷脂,并定量分析了磷脂组分和相应含量。为验证南极磷虾磷脂的延缓衰老的功能,以小鼠为实验对象,观察南极磷虾磷脂对小鼠衰老的实验影响,为南极磷虾磷脂抗衰老功能食品及药品的研发提供依据。 本文主要分为以下三部分: (一)南极磷虾磷脂提取条件优化设计 利用有机溶剂萃取法提取制备南极磷虾粗脂并通过丙酮纯化得到南极磷虾总磷脂。实验系统分析萃取液组成、提取液料比、提取时间、水洗比例等因素,通过单因素试验和正交试验得到南极磷虾磷脂最佳制备工艺。结果表明,当萃取液组成为氯仿:甲醇=2:1,液料比为13:1,提取时间为3.5h时,南极磷虾提取效率最高,为4.06%。 (二)南极磷虾磷脂组分含量及脂肪酸成分分析 以南极磷虾头胸甲下内脏部分为材料,按照(一)中优化的提取方法提取南极磷虾总脂,分离出磷脂并进行成分分析检测。参照GB/T5009-2003食品卫生检验方法中水分的测定方法,测定了磷虾内脏的水含量为78.95%。提取磷虾内脏总脂后,利用丙酮萃取其中总磷脂,以磷脂标准品为对照进行单向薄层层析,分离磷脂各组分,并利用钼蓝比色法测定提取的总磷脂中主要成分的含量:卵磷脂为50.40%,脑磷脂为20.17%;利用气相色谱分析总磷脂中各脂肪酸组成。 (三)南极磷虾磷脂延缓小鼠衰老的作用 为验证南极磷虾磷脂的延缓衰老作用,实验选取昆明种8周龄雄性小鼠,随即分为空白对照组、阴性对照组、阳性大豆磷脂对照组和低、中、高南极磷虾磷脂剂量组。采用腹腔注射D-半乳糖诱导小鼠亚急性衰老模型,实验造模的同时分别灌胃相应的药物,42天后测定肝脾指数,取血清和组织测定CAT、SOD、GSH-PX、MDA等指标,制备皮肤组织切片,观察皮肤组织状况。由实验结果可知:南极磷虾磷脂能降低衰老小鼠体内MDA水平,同时提高机体内CAT、SOD、GSH-PX等抗氧化酶含量,延缓肝脾等脏器衰老水平,修复皮肤衰老损伤。在血液及组织抗氧化酶指标方面,南极磷虾磷脂效果优于大豆磷脂,可能与南极磷虾中含有丰富的多不饱和脂肪酸,特别是DHA和EPA,能更有效地清除自由基有关。通过切片观察发现南极磷虾磷脂能够修复皮肤因衰老造成的损伤,其作用效果与磷脂摄取浓度呈正相关。


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