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五氯酚钠的检测技术及在中华绒螯蟹中代谢规律的研究

梁倩  
【摘要】:五氯酚钠曾在我国大量用于杀灭钉螺、杂鱼等,因稳定的化学性质使以往使用的五氯酚钠在环境中的残留还会持续相当长的一段时间,对渔业产品的质量仍有较严重的影响。中华绒鳌蟹产业在我国具有较广阔的发展前景,而五氯酚钠残留在中华绒螯蟹中多有检出,为了研究苗种期间使用五氯酚钠对成蟹的影响以及五氯酚钠在中华绒螯蟹体内降低到检测限以下所需要的时间,有必要对五氯酚钠在中华绒螯蟹中的检测方法及药物代谢规律进行相关研究,本文主要研究内容:(1)水产品中五氯酚钠残留检测方法的研究(2)不同浓度下五氯酚钠在中华绒鳌蟹体内代谢规律的研究(3)五氯酚钠在中华绒螯蟹中代谢形态的研究,具体如下: 1.建立了水产品中五氯苯酚及其钠盐残留量检测的气相色谱内标法。样品经正己烷提取后碳酸钾反萃取经乙酸酐衍生,用正己烷提取衍生物,HP-5MS(30m×250μm×0.25μm)色谱柱分离,用配备微池电子捕获检测器的气相色谱测定,以2,4,6-三溴苯酚作为内标物,内标法定量。结果表明:该方法在0.2~20μg/L范围内线性关系良好,相关系数r=0.9996,在加标水平PCP为2.0、5.0、10.0、50.0μg/kg,内标为50.0μg/kg时,加标回收率为85.8%~109.0%,RSD为0.8%~9.3%,最低检出限为0.6μg/kg。 2.建立了中华绒螯蟹中五氯苯酚及其钠盐残留量检测的气相色谱质谱法。采用NCI源,选择反应监测(SIM)方式,灯丝电流为50μA,传输线温度250℃,电子能量为70eV,离子源温度为150℃;五氯苯酚的定量离子为m/z307.8,定性离子为m/z286.8、288.8、305.8、307.8;内标物的定量离子为m/z313.8,定性离子为m/z294.8、296.8、313.8、315.8。该方法在添加水平PCP为5.0μg/kg、10.0μg/kg和25.0μg/kg,内标为25.0μg/kg时,添加回收率为87.2%~106.9%,最低检出限为1.0μg/kg。 3.建立了中华绒螯蟹中五氯苯酚及其钠盐残留量的气相色谱串联质谱法。采用NCI源,选择反应监测(SRM)方式,灯丝电流为50μA,传输线温度250℃,电子能量为70eV,离子源温度为150℃;五氯苯酚的母离子为m/z307.8,子离子为m/z230.9、265.0;内标物的母离子为m/z313.8,子离子为m/z236.7、271.0。该方法在添加水平PCP为5.0μg/kg、10.0μg/kg和25.0μg/kg,内标为25.0μg/kg时,添加回收率为97.5%~104.4%,最低检出限为1.0μg/kg。 4.研究池塘养殖中3种药浴剂量下五氯酚钠在中华绒螯蟹血淋巴、肌肉、肝胰腺和鳃各组织中的分布与代谢规律。在自然水温下,按照五氯酚钠浓度为1000μg/kg、200μg/kg、50μg/kg药浴1d后放入池塘释放,进行消除试验,不同时间点取样,气相色谱内标法测定血淋巴、肌肉、肝胰腺、鳃中五氯酚钠的残留浓度,绘制药物浓度-时间曲线,利用DAS软件分析数据。研究结果表明:在消除过程中,50μg/kg药浴浓度下,肝胰腺、鳃、血淋巴、肌肉中低于检出限的时间为60d、76d、76d、108d;200μg/kg药浴浓度下,肝胰腺、鳃、血淋巴、肌肉中低于检出限的时间为124d、124d、156d、108d;1000μg/kg药浴浓度下,肝胰腺、鳃、血淋巴、肌肉中低于检出限的时间都为156d。通过DAS软件计算的主要药代动力学参数:在50、200、1000μg/kg给药量时,中华绒螯蟹血淋巴中五氯酚钠的吸收半衰期(T1/2α)和消除半衰期(T1/2β)分别是0.748、1.09、3.07d和7.03、7.77、6.02d,整体清除率(CLs)分别是0.0414、0.0641、0.117μL/kg·d;不同剂量下鳃的消除半衰期为3.46d、2.49d、3.93d;肝胰腺的消除半衰期分别是5.63d、5.85d、6.93d;肌肉的消除半衰期分别是5.48d、7.20d、6.42d。 5.通过3种不同的提取方式初步研究了五氯酚钠在中华绒螯蟹4种组织中的代谢形态。试验一通过消解后提取了五氯酚钠的总量,试验二提取了组织样品中的分子态,试验三提取了组织样品中的离子态,鳃中不同时间点所测定的试验二占试验一的百分比在42.6%~47.4%,试验三占试验一的百分比在36.2%~45.7%。肝胰腺、血淋巴、肌肉、鳃中各提取方法所占的百分比不同,肝胰腺中不同时间点试验二占试验一的百分比为28.2%~37.2%,试验三占试验一的百分比为42.0%~55.3%。血淋巴中试验二占试验一的百分比为26.4%~38.6%,试验三占试验一的百分比为30.2%~36.3%。肌肉中试验二占试验一的百分比为32.8%~47.5%,试验三占试验一的百分含量为9.2%~13.7%。


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