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三疣梭子蟹消化酶性质的研究

胡毅  
【摘要】: 本论文综述了国内外甲壳动物消化酶研究的进展,利用酶学研究的方法研究了三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)消化酶的性质。文中探讨了①温度、pH对三疣梭子蟹消化酶活性的影响及热、酸碱稳定性。②不同底物及浓度对三疣梭子蟹消化酶活力的影响。③反应介质中NaCl浓度对三疣梭子蟹消化酶活力的影响④金属离子对三疣梭子蟹消化酶活力的影响。主要结果如下: 1、蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶的最适温度分别为55℃、55℃、65℃;在最适温度下测得蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶的最适pH分别为7-8、7.5、4.8。消化酶在短时间内有很高的热稳定性和很广的酸碱稳定性范围。中肠腺是蛋白酶的主要分泌器官,淀粉酶在不同消化组织没有显著差异。胃和肠是纤维素、脂肪的主要消化器官。 2、以酪蛋白、TAME、SAPPN、马尿酰苯丙氨酸、N-马尿酰-L-精氨酸、淀粉、羧甲基纤维素钠为底物,三疣梭子蟹中肠腺蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、羧肽酶A、羧肽酶B、淀粉酶、纤维素酶活力在底物浓度分别为:5mg/ml、0.6mM、1mM、0.5mM、0.45mM、4mg/ml、0.6mg/ml时活力最大。米氏常数(K_m)分别为1.185mg/ml、0.132mM、0.147mM、0.119mM、0.194mM、1.25mg/ml、0.3mg/ml。BAEE为三疣梭子蟹中肠腺胰蛋白酶最适底物,不同消化器官对不同胰蛋白酶底物的消化能力不一致。 3、以酶学分析的方法研究10种金属离子(Cu~(2+)、Mg~(2+)、Fe~(3+)、Hg~(2+)、Zn~(2+)、Ca~(2+)、Pb~(2+)、Cd~(2+)、Ag~+和Mn~(2+))对三疣梭子蟹蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、羧肽酶A、羧肽酶B、淀粉酶和纤维素酶活力的影响,实验表明,在实验设置的浓度范围内,Ca~(2+)、Mn~(2+)、Mg~(2+)、Fe~(3+)、Pb~(2+)在低浓度(0.5mM)对蛋白酶活力影响不显著,其他金属离子影响显著;Ca~(2+)、Cd~(2+)、Mg~(2+)、Mn~(2+)在三种浓度下,对胰蛋白酶均表现为显著性激活作用;Ca~(2+)对胰凝乳蛋白酶有激活作用,Mg~(2+)和Cu~(2+)在低浓度对胰凝乳蛋白酶有激活作用;Hg~(2+)对羧肽酶A有激活作用,Mg~(2+)、Mn~(2+)、Zn~(2+)在低浓度对羧肽酶A有激活作用;Ca~(2+)对羧肽酶B有激活作用,Mg~(2+)在低浓度对羧肽酶B有激活作用;Ca~(2+)、Cd~(2+)、Mn~(2+)对淀粉酶表 现为激活作用,znZ+、Fe3‘、Pb,’低浓度对淀粉酶有激活作用;znZ+、Fe3‘、MnZ’、 cu2+对纤维素酶表现为激活作用。除此之外,其他金属离子均表现为抑制作 用,且抑制作用随浓度的升高而升高。 4、本文以酶学分析的方法研究了在反应介质中添加NaCI对三疵梭子蟹 (portunos lri了ubercularus)中肠腺蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、梭肤 酶A、竣肤酶B、淀粉酶活力的影日t句,NaCI浓度一设置为OM、0.O05M、0.01M、 0.OSM、O.IM、0.SM、1.OM、2.OM八个梯度。实验表明,反应介质中添加 NaCI对消化酶活力影响显著,除梭肤酶B外,反应介质中添加NaCI对三疵 梭子蟹消化酶均有激活作用。当反应介质中NaCI浓度为0.1一0.5M时蛋白酶 活力最大;当反应介质中NaCI浓度O.SM时胰蛋白酶活力最大;胰凝乳蛋白 酶在反应介质中NaCI浓度为IM时一酶活力最大;三沈梭子蟹梭肤酶A在反 应介质中NaCI浓度为0.05一O.IM时酶活力最大;NaCI对梭肤酶B有抑制作 用,在反应介质中ZMNdCI的条件下,有未加NaCI时酶活力的60%;NaCI 在O一ZM的范围内对淀粉酶均有激活作用,其最大激活能力在0.5M附近。


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