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对虾免疫增强剂的研究与应用

王新霞  
【摘要】:本文综述了甲壳动物免疫学研究进展及水产动物免疫增强剂的国内外应用现状,主要研究了中国明对虾幼体免疫增强剂的应用,凡纳滨对虾成体复合免疫增强剂的筛选及应用并对可能机理进行了初步的探讨,研究结果总结如下: (1) 养殖动物广泛发病和大量死亡是全世界海水养殖业所面临的共同问题。近年来由于疾病(弧菌病,病毒病等)的困扰,使我国乃至世界范围内的对虾养殖发展受到严重制约,造成了极大的经济损失。疾病问题由病原、宿主及环境三个方面共同作用造成的,所以除了做好养殖环境的保护外,提高养殖动物本身的免疫能力是保持海水养殖持续健康发展的一个重要途径。正因为如此,世界范围内对海水养殖动物(如甲壳类)的免疫学及免疫增强剂的研究空前高涨,也取得了显著的成绩。本文首先对目前在甲壳类免疫学研究方面取得的最新研究成果作一综述,同时总结了目前在水产动物中免疫增强剂的应用现状。 (2) 分别用五种不同浓度(0,0.1,0.3,0.5,1mg/ml)的β-葡聚糖溶液对中国明对虾溞状、糠虾幼体进行浸浴,正常养殖48 h后,用浓度为5.9×10~6cfu/ml的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)进行攻毒48h,未攻毒组测定其体长及变态指数。结果显示,攻毒后0.1、0.3和0.5mg/ml处理组的溞状幼体的存活率显著高于对照组(P<0.05),0.3和0.5mg/ml处理组的糠虾幼体的存活率显著高于对照组(P<0.05)。0.3和0.5mg/ml的处理组显著提高了溞状幼体的变态率和生长(P<0.05),但不同处理组对糠虾幼体生长的影响不显著(P>0.05)。结果表明,β-葡聚糖可以作为免疫增强剂在中国明对虾育苗阶段使用,建议浸浴使用浓度为0.3-0.5mg/ml。 (3) 研究了β-1,3/1,6-D-glucan作为饲料添加剂对中国明对虾幼体的存活、生长、发育、非特异性免疫及抗副溶血弧菌能力的影响。将β-glucan以0.00%,0.10%,0.25%和0.50%四种不同的剂量添加到微粘合饲料中投喂对虾幼体,结果表明,在孵化后第14天(14 dph),投喂含glucan饲料组的变态指数(DI)显著高于对照组(P<0.05);投喂glucan-0.25%和glucan-0.5%饲料组的存活率、体长及特定生长率(SGR)显著高于对照组(P<0.05)。在9和14dph,分别测定了幼体的酚氧 中国海洋大学博士学位论文:对虾免疫增强剂的研究与应用 化酶(P0),超氧化物歧化酶(s OD),酸性磷酸酶(ACP)及碱性磷酸酶(ALP)。结果 显示这些免疫指标都能不同程度的被p一glucan促进‘在1 4dPh,用副溶血弧菌厂 parahaemo加icus进行了幼体的攻毒实验,结果表明,对照组的累积死亡率显著 高于含有p一glucan的饲料组(P0 .05)。实验发现,glucan一0.25%饲料组在各项不 同指标中均表现较好,因此微粘合饲料中的建议添加量为0.25%左右。 (4)研究饲料中添加p一l, 3/1,6一D一glucan后的不同投喂方式对中国明对虾幼体 的存活、生长、发育、非特异性免疫及抗副溶血弧菌能力的影响。将p一glucan以 0.25%的剂量添加到微粘合饲料中,以不同的投喂方式投喂对虾幼体,即DO(一 直投喂基础饲料);Dl(一直投喂含0.25%p一葡聚糖饲料);3DI一3Do(三天投喂 含0.25%p一葡聚糖的饲料一三天投喂基础饲料);IDI一3D0(一天投喂含0.25%p- 葡聚糖的饲料一三天投喂基础饲料),共4个处理,结果表明,在14 dph,投喂 Dl饲料组在总存活率,变态指数,体长,特定生长率方面均高于其它各组,虽 然有时差异不显著。在免疫指标方面,在9和14 dPh分别进行了酚氧化酶(Po)、 碱性磷酸酶(ALP)、超氧化物歧化酶(S OD)、酸性磷酸酶(ACP)活力的测定, 结果表明,投喂Dl饲料组的四个免疫指标均高于其它三组,虽然有时差异不显 著。在14 dPh的攻毒实验结果表明,对照组的累积死亡率显著高于Dl组 (尸0.05),而1 Dl一3DO和3DI一3DO的累积死亡率则与其它各组差异不显著。实 验结果表明,间隔投喂方式并不适合于对虾幼体,在中国明对虾幼体饲料中使用 p一葡聚糖时,建议添加量为0.25%,并采用一直投喂的方式。 (5)利用正交实验设计进行几种免疫增强物质的筛选,根据正交实验分析方法 得出了主要影响因子(p一1,3/1,6一D一葡聚糖、低聚异麦芽糖、v。及中草药)和最 佳应用水平。 (6)利用25天对虾养殖实验,研究p一l,3/1,6一D一葡聚糖、低聚异麦芽糖、Vc 及中草药的两两组合对凡纳滨对虾抗病力及非特异性免疫指标的影响。共制作 11组饲料,其中一组为对照饲料。结果表明,对照组累积死亡率最高,而投喂 中草药,寡糖十glucan以及vc十中草药三组累积死亡率最低,显著低于对照组 (尸0.05),其它各组之间差异不显著,免疫指标的测定结果表明,在攻毒后9 天,各免疫指标都有不同程度的降低,但在14天,只有中草药,寡糖+glucan 以及vc+中草药三组有显著升高趋势。根据研究结果,认为中草药,寡糖十glucan 以及Vc+中草药三组能增强凡纳滨对虾免疫反应,提高对虾抗病毒能力。 中国海洋大学博士学位论文:对虾免疫增强剂的研究与应用 (7)研究p一1,3/1,6一D一葡聚糖及低聚异麦芽糖对凡纳滨对虾生长,存活及非特 异性免疫指标的影响。共制作4种饲料DI:对照组,DZ:含0.2%葡聚糖组,D3: 含0.2%低聚异麦芽糖组,D


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