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蓝藻毒素的诱导、分离、提取及鉴定

徐宗军  
【摘要】:溶血毒素(hemolysins)是一类可以溶解动物血红细胞的毒素,存在于动物、细菌和藻类中,主要以小分子有机物质为主。 本文以从青岛近海和海水养殖池中分离到的两种蓝藻为材料,对其产生的胞外产物进行了研究,结果发现从它们所产生的胞外产物中分离得到了一种由Cu~(2+)诱导产生的具有溶血活性的高分子蛋白质分子,并初步行了分离鉴定和活性的测定,确定其为蓝藻毒素。 藻种的分离鉴定:利用平板划线技术从采集的藻样中分离纯化出两种蓝藻,然后进行无菌培养,根据藻类的形态特征,初步鉴定认为这两种蓝藻均为蓝藻门(Cyanobacteria),蓝球藻目(Chroccoccus),Synchococcus属的种类,暂定为Synchococcus sp Qingdao JZ 1S和synchococcus sp Qingdao HD 3S。 藻种生长条件的确定:利用多因子实验设计,研究了pH、温度、盐度和光照等环境因子对Synchococcus sp Qingdao JZ 1S和Synchococcus sp Qingdao HD 3S生长的影响。结果发现:Synchococcus sp Qingdao JZ 1S生长的最适pH值为8.56;最适温度为27℃;最适光照为4800Lx;最适盐度为28。Synchococcus sp Qingdao HD 3S生长的最适pH值为8.43;最适温度为27℃;最适光照为6000;最适盐度为28。 实验研究了铜对这两种蓝藻的毒性效应,发现铜对Synchococcus sp Qingdao JZ 1S生长的48h-EC_(50)和96h-EC_(50)分别是455μg-Cu/L和372μg-Cu/L Synchococcus sp Qingdao HD 3S生长的48h-EC_(50)和96h-EC_(50)分别是338μg-Cu/L和262μg—Cu/L。。 分别在这两种蓝藻的最佳的生长条件和在铜的96h-EC_(50)下,对两种蓝藻进行了溶血毒素的诱导、分离和鉴定实验,结果在这两种蓝藻的胞外产物中测定出具有溶血活性的胞外毒素存在。Synchococcus sp Qingdao JZ 1S溶血价为23HU/ml Synchococcus sp Qingdao HD 3S溶血 价为7.SHU/ml可见分nehocoeeus印Qingdao Jz 15具有明显的溶血 活性。仅确定了今nchococcu:sP Qingdao JZIS的胞外毒素是一种具 有溶血活性的胞外蛋白。


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