仙客来组织培养及其次生代谢物研究

【摘要】：仙客来(Cyclamen Persicum Mill)亦称“兔耳花”、“兔子花”，属报春花科(primulaceae)仙客来属多年生草本植物，球茎扁球形。原产希腊、叙利亚。目前在我国一般作温室栽培，是北方花卉产业的重要种类之一。仙客来栽培过程中，由于花农在制种过程中连年自交、近亲繁殖，造成我国原有品种的严重退化；对于新引入和选育的优良品种，后代种苗的性状也出现严重分离，不能保持种系的纯化。利用组织培养的方法建立优系仙客来的无性繁殖体系，具有恢复和保持种性、固定优良性状、保证苗木的整齐性、快速大量繁殖优系品种的优势。 仙客来除有观赏价值外，其球茎有多种生物学活性，在土耳其民间药方有抗受精、促进子宫收缩、通经活血、治愈蛇毒等功效。球茎内存在的有毒成份也可以引发肠炎、盗汗、耳鸣、痉挛等症状。对仙客来活性物质的研究对合理开发其药用价值可提供一定的理论依据。 本研究以仙客来(Cyclamen persicum Mill)无菌种苗为实验材料，以器官发生途径对其进行无性繁殖体系的建立，同时研究了组织培养过程和栽培植株的次生代谢物的抑菌活性、化学成分的分离、纯化和初步定性，获得以下结果： 1．仙客来由于其独特的遗传杂合性，在组培的过程中，不同品种、单株、不同器官等受激素、糖源、无机元素、继代次数等因素影响。本研究中，叶柄和球茎均可作为初培养愈伤组织诱导的外植体，2，4-D对外植体的脱分化是必需的，其与6-BA的配合对不定芽的分化和启动有一定的相关性，继代培养应及时撤掉2，4-D，否则对不定芽的分化有抑制作用。随着继代次数的增加，要调节6-BA的浓度维持在1mg／l，可获得持续稳定的不定芽分化率。继代过程中，不同品种和不同单株体系间分化能力有显著差异，同时亦受6-BA浓度的影响。组培苗不定根的发生对激素种类和品种交互作用非常敏感，尤其品种间的差异极显著。生根前经一代生长壮苗可显著提高瓶苗叶片状态和生根指标，同时新梢叶片数量与仙客来生根指标之间亦有显著的相关性。 2．仙客来愈伤组织经液体培养，可以获得培养液(胞外产物)和愈伤组织(胞内产物)。抑菌活性试验结果表明，液体培养愈伤组织的石油醚粗提物和培养液的氯仿粗提物及其经柱层析分离得到的多个组分均对多种供试菌株有明 摘要 显的抑菌活性，而愈伤组织的氯仿、无水乙醇粗提物和培养液的无水乙醇粗 提物及其分离组分仅有极少数组分有抑菌活性，且仅对个别菌株有抑制作用。 仙客来栽培植株石油醚和氯仿粗提物及其分离组分均无抑菌活性，而其无水 乙醇粗提物及其分离组分对啤酒酵母菌表现出明显活性。 3.液体培养液、愈伤组织和栽培植株球茎的无水乙醇提取物分别经氯仿、丙酮、 无水乙醇、不同浓度的稀醇洗脱，结果显示愈伤组织和栽培植株球茎无水乙 醇、95%乙醇、80%乙醇、50%乙醇、30%乙醇的洗脱组分皂普定性均呈阳性， 而液体培养液的各洗脱组分皂昔定性为阴性。 4.液体培养液经州HZS认酸解后氯仿提取，反复柱层析分离得到单一浅黄色针状 晶体，经MS、IR、UR、‘H谱、’3C谱、HSQC、HMBC、’H一，H COSY等相关谱图， 此化合物为双(5一甲酞基糠基)醚，BIS(5一formyl一furfuryl)ether，是液 体培养液中的次生代谢物提取改构而得到的纯品。 关键词:仙客来;无性繁殖体系;抑菌活性;次生代谢物;皂普