收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

嵌合降钙素基因的构建及表达

王玉梅  
【摘要】:降钙素(Calcitonin,CT)是由哺乳动物的甲状腺C细胞或鱼类的后腮体分泌的多肽类激素,由32个氨基酸残基组成,主要参与体内的钙、磷代谢。天然降钙素中,鲑鱼降钙素(sCT)的活性最高,而人降钙素(hCT)的活性相对较低。化学合成sCT用于临床多年,是治疗骨质疏松、Paget's病、高钙血症和变形性骨炎等的有效药物。 为改进重组降钙素的抗原性和活性,我们以人和鲑鱼降钙素为先导,利用化学合成和酶法合成了长111bp的嵌合降钙素(hsCT)基因,该基因编码34个氨基酸的多肽,其中包括14个人源氨基酸,16个鲑鱼源氨基酸。蛋白质软件分析预测,其活性高于hCT,而抗原性较sCT降低。 首先利用融合表达载体pGEX,获得了含GST的融合蛋白(GST-hsCT),并证明具有人降钙素的抗原决定簇部分;但在纯化目的蛋白时,无法实现高效率切割。随后,我们利用串联多拷贝策略,以单分子和多聚体两种形式表达了系列降钙素,但表达量仍然偏低。 选用安全无毒的藻蓝蛋白的β亚基基因通过一柔性手背与嵌合CT基因融合,构建融合蛋白cpcB-hsC基因,首先在大肠杆菌,先后选用pGEX和pLEX两个系统对该融合基因进行了表达,并对表达的融合蛋白的抗原性及活性进行了测定。同时,还探讨了融合串联形式存在的蛋白表达。 在对表达的蛋白进行抗原性研究时发现,本研究最初设计并合成的基因所表达的降钙素虽然具有人降钙素的抗原决定簇部分,但与抗鲑鱼降钙素抗血清仍然具有交叉反应,为探索嵌合降钙素的抗原位点与活性位点,本研究对所构建的融合基因进行了定点突变,并对各突变体的抗原性与活性进行了比较。 在对比试验中,对藻蓝蛋白(CPC)基因进行了表达和活性测定,对重组CPC亚基的生物活性进行了初步探讨,同时制备了其单克隆抗体,为CPC的鉴定与纯化提供了方便。 在大肠杆菌获得了低抗原、高活性的融合蛋白后,我们又用同源重组的方法将融合蛋白cpcB-hsC基因整合入集胞藻,在集胞藻内获得了表达,尽管表达量只有1%,但具有一定的降血钙作用,


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 何召庆,秦泽荣,徐镔蕊,王春凤,张莉,刘尚高;降钙素基因在乳酸杆菌中的克隆[J];中国兽药杂志;2002年06期
2 戴光荣,施秉银;降钙素基因工程的研究进展[J];医学综述;2005年05期
3 Y.Kameda;狗、兔、鼠的甲状腺C细胞与免疫反应的血降钙素基因有关的肽的个性发生[J];解剖学研究;1989年02期
4 ;激素和活性多肽[J];生物技术通报;1989年04期
5 张宝红,茅云翔,王高歌,杨官品,张学成;3种不同来源的鲑鱼降钙素基因的克隆及其序列比较[J];青岛海洋大学学报(自然科学版);2002年04期
6 张丽华,程智慧,陈杭,赵吉强,李霞;降钙素基因对胡萝卜的遗传转化[J];生物技术通讯;2005年05期
7 周一江;张学成;王玉梅;臧晓南;;人/鲑降钙素嵌合基因在大肠杆菌中的串联表达[J];中国海洋大学学报(自然科学版);2007年01期
8 高必峰,闵永洁,谢毅,王启松;降钙素基因的化学合成与克隆[J];基础医学与临床;1990年05期
9 王翔林,梁践,孙玉昆;降钙素基因工程研究[J];沈阳药科大学学报;1995年04期
10 ;激素和活性多肽[J];生物技术通报;1991年05期
11 孙国凤;;英国Celltech公司临床试验蛛网膜下腔出血治疗药CGRP[J];生物技术通报;1988年12期
12 ;激素和活性多肽[J];生物技术通报;1990年09期
13 郑莉,赵明,王会信;人降钙素基因在大肠杆菌中的克隆与表达[J];军事医学科学院院刊;1998年01期
14 ;激素和活性多肽[J];生物技术通报;1986年11期
15 ;解剖学报第22卷(1991年)文题索引[J];解剖学报;1991年04期
16 郭学勤;;生理学[J];中国医学文摘(基础医学);1995年03期
17 张军;许百男;李翀;孟祥辉;;胚胎大鼠背根神经节神经元的培养与纯化[J];解放军医学杂志;2006年12期
18 张学珍;科坛巾帼竞风流[J];中国青年科技;1995年05期
19 陈嘉;;神经肽的研究[J];医学与哲学(人文社会医学版);1990年04期
20 王晓云,郭霞,钱忠明;骨组织中降钙素基因相关肽阳性神经的分布及生理作用[J];中华骨科杂志;2005年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 何召庆;秦泽荣;徐镔蕊;王春凤;张莉;刘尚高;;降钙素基因在大肠杆菌和乳酸杆菌中的表达[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2002年
2 蔡军;吴锐;任智勇;赵崇;何炜;尹潍;张镜宇;;基因工程降钙素的实验研究[A];生命科学与生物技术:中国科协第三届青年学术年会论文集[C];1998年
3 刘宇鹏;赵德伟;崔旭;王卫明;孙强;;神经生长因子在大鼠骨折部位的表达[A];2009年全国骨与关节损伤新技术研讨会暨第六届股骨头缺血性坏死修复与再造学习班论文汇编[C];2009年
4 唐朝枢;;心血管活性多肽研究新进展[A];中华医学会第十三次全国心血管病学术会议专题报告专辑[C];2011年
5 李岱;李年生;陈清泉;罗丹;邓汉武;李元建;;在自发性高血压大鼠降钙素基因相关肽介导的吴茱萸次碱的降压作用[A];湖南省生理科学会2006年度学术年会论文摘要汇编[C];2007年
6 陈清泉;罗丹;王丽;张晓红;李元建;;激动辣椒素受体上调背根神经节神经元细胞中CGRP的表达[A];湖南省生理科学会2006年度学术年会论文摘要汇编[C];2007年
7 罗丹;张懿玮;彭维杰;陈清泉;李岱;邓汉武;李元建;;辣椒素受体调节内皮源性降钙素基因相关肽的表达和分泌[A];湖南省生理科学会2006年度学术年会论文摘要汇编[C];2007年
8 张敏;崔艳茹;于芳;刘惠君;张长青;管茶香;;降钙素基因相关肽促气道上皮损伤修复作用的研究[A];湖南省生理科学会2006年度学术年会论文摘要汇编[C];2007年
9 彭丽花;朱晓琳;刘持;向阳;谭宇蓉;秦晓群;;肺内调节肽对人支气管上皮细胞B7-1表达的影响[A];湖南省生理科学会2006年度学术年会论文摘要汇编[C];2007年
10 李健哲;彭军;李元建;;降钙素基因相关肽介导了吴茱萸次碱对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌重构的保护作用[A];湖南省首届生理—药理科学青年论坛论文摘要汇编[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前5条
1 熊婷;外源性降钙素通过上调子宫内膜上皮细胞β3表达促进胚泡植入[D];华中科技大学;2012年
2 戴哲浩;去卵巢、糖皮质激素、降钙素对雌性大鼠骨强度影响的实验研究[D];中南大学;2011年
3 陈云松;转鲑鱼降钙素基因酵母的发酵条件优化及安全性评价[D];中国海洋大学;2010年
4 井明艳;锌影响大鼠生长发育及其与降钙素基因相关肽调控摄食的机理研究[D];浙江大学;2007年
5 张友灿;降钙素基因相关肽刺激角质形成细胞分泌趋化因子CCL27及其机制的相关研究[D];山东大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 卜祥斌;鸡降钙素基因重组质粒的构建及其在蛋鸡体内的表达研究[D];扬州大学;2003年
2 何顺漪;利用IMPACT-TWIN系统制备降钙素和胰岛素类似物的研究[D];东华大学;2014年
3 剧海;新型人降钙素基因在大肠杆菌中的表达[D];天津医科大学;2003年
4 赵淑芬;肺癌患者血清降钙素水平的临床意义[D];青岛大学;2011年
5 赵中涛;降钙素对乳鼠成骨细胞增殖及IGF-1表达的影响[D];山西医科大学;2011年
6 全丽萍;鸡降钙素真核表达质粒在老龄蛋鸡中应用效果研究[D];扬州大学;2010年
7 李洪丽;鲑鱼降钙素与降钙素基因相关肽基因原核表达的研究[D];黑龙江大学;2010年
8 杨志家;新疆哈萨克族EH患者血浆降钙素基因相关肽和一氧化氮水平的相关性研究[D];石河子大学;2010年
9 严守升;鲑鱼降钙素基因在大肠杆菌中的表达纯化及药理活性研究[D];湖南中医药大学;2005年
10 周燕;降钙素基因相关肽在颌骨骨折愈合过程中对转化生长因子-β_1的调控作用研究[D];第三军医大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前4条
1 高思敏 时仲省 刘春阳;小儿充血性必衰病因有新解[N];健康报;2000年
2 邓旭光;中西医结合治疗高血压病疗效评价的新特点[N];中国医药报;2002年
3 衣晓峰;针炙治疗高血压性脑出血有理论依据[N];中国医药报;2002年
4 高思敏 时仲省 刘春阳;内皮素与降钙素基因相关肽失衡小儿充血性心力衰竭的“帮凶”[N];大众卫生报;2000年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978