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壳寡糖、氨基葡萄糖及其衍生物的制备和抗肿瘤活性研究

张莉  
【摘要】:本文报道了壳寡糖、氨基葡萄糖及其衍生物的制备和抗肿瘤活性研究。首先对壳寡糖(COS)、氨基葡萄糖盐酸盐(GlcNH_2.HCl)、N-乙酰氨基葡萄糖(NAG)、氨基葡萄糖(GlcNH_2)进行了制备和纯化,在此基础上开展了抗肿瘤活性的实验研究。MTT法测定对人肝癌细胞SMMC-7721生长的影响,结果表明,GlcNH_2.HCl和GlcNH_2对人肝癌细胞SMMC-7721生长的的抑制作用呈剂量依赖性,COS、NAG和Arg对细胞生长的抑制作用不明显。流式细胞术分析细胞周期表明,GlcNH_2.HCl可以把细胞周期特异性地阻滞在S期。体内实验观察了GlcNH_2.HCl对小鼠S180肉瘤的抑制作用,在125~500mg/kg剂量范围内,均有明显抑制肿瘤的作用,同时可以增加两个主要免疫学器官脾脏和胸腺的重量,促进ConA诱导的体外小鼠淋巴细胞转化。 在以上实验的基础上,首次在醇相反应体系下制备了羧甲基氨基葡萄糖,电位滴定显示羧甲基化度为97.45%,以此为载体,合成了葡萄糖胺-精氨酸(GlcNH_2-Arg),通过红外光谱分析、紫外光谱扫描、熔点测定等对其结构进行了表征,初步证明制得的GlcNH_2-Arg是一种新型化合物。以制备的GlcNH_2-Arg为材料,考察体外对SMMC-7721细胞生长的影响,结果表明GlcNH_2-Arg对细胞的生长抑制作用表现为剂量依赖性。在相同的作用浓度下,GlcNH_2-Arg的抑制率明显高于GlcNH_2·HCl的抑制率。DNA琼脂糖凝胶电泳、荧光染色、流式细胞仪分析细胞周期、透射电镜观察等方法从形态学和生化学两方面证实GlcNH_2-Arg有诱导SMMC-7721细胞发生凋亡的作用。 本实验首次从海洋软体动物菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)中提取分离得到一种蛋白聚糖成份PG1,SDS-PAGE电泳显示分子量大约在20kDa。体外实验考察了对人肝癌细胞SMMC-7721和人正常肝细胞HL-7702生长的影响,结果在抑制肝癌细胞生长的浓度范围下,PG1不影响肝细胞的正常生长和功能。体内实验表明,PG1能显著抑制小鼠S180肉瘤的生长,同时提高荷瘤小鼠脾脏的重量,促进荷瘤小鼠脾脏淋巴细胞转化。PG1对小鼠S180肉瘤的抑制作用可能是通过直接杀伤肿瘤细胞的细胞毒作用和提高小鼠细胞免疫水平来实现。


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