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仿刺参Apostichopus japonicus胚胎发育和主要系统的组织学研究

朱峰  
【摘要】: 刺参养殖作为北方沿海水产养殖重要的新兴产业之一,已经取得了显著的经济和社会效益。在刺参人工育苗和增养殖技术日臻完善的今天,养殖技术对刺参养殖做出了骄人的贡献。但是2002年的刺参腐皮综合症的爆发,让人们意识到养殖技术似乎遇到了它难以逾越的瓶颈。刺参腐皮综合症的传染性和复杂性,让人们不但从养殖体系中寻找原因,更多的目光转移到了刺参本身的生物学特征上。随着刺参养殖技术的进步,人们对刺参的胚胎发育和生殖腺周期有比较详细的了解,但是仍缺少生动直观的参考资料。由于刺参独特的生物学构造和特殊生理活动,也使得刺参的生理机能及组织学和吐脏再生的分子生物学成为研究的热点。 本文在刺参人工育苗的环境下,观察并叙述刺参自然孵化的胚胎发育和幼体生长变化的过程,并拍照记录。在显微镜下测定刺参胚胎及幼体的直径、全长等形态学特征,并建立胚胎发育时序表,绘制了幼体生长曲线。 通过解剖学方法和石蜡切片、HE染色,全面而系统的观察和描述了刺参各个主要系统的构造和组织结构,为进一步研究刺参的生理特征提供参考。以富集纯化刺参的体腔细胞作为抗原,免疫新西兰大白兔,初步探索了刺参体腔细胞抗体的制备的最佳条件,为利用免疫组化手段来寻找与体腔细胞具有同源性的内脏器官或组织做准备。 运用间接酶联免疫反应,检测刺参抗体效价大约是1:800,抗体的效价较低,与刺参的体腔细胞种类较多和环境中细菌及刺参内脏的干扰有关系。利用竞争性酶联免疫反应检测环境中干扰细菌灿烂弧菌和嗜水气单胞菌对体腔细胞抗原的竞争性较弱,而呼吸树匀浆组织对体腔细胞抗原有一定的竞争性,这说明在抗原制备时可能被呼吸树污染。 利用间接荧光免疫检测体腔细胞抗体和体腔细胞结合的特异性,在荧光显微镜下发现与多克隆抗体结合的刺参体腔细胞发出蓝绿光,而用阴性血清或不加荧光抗体检测观察荧光较弱或不发出荧光,刺参体腔细胞多克隆抗体和呼吸树结合发出淡蓝色的荧光,表明多克隆抗体和呼吸树有一定的结合性。 以上实验表明,进一步排除细菌及刺参内脏的干扰,开发生物技术手段分离纯化体腔细胞作为抗原,制备高效价、高特异性的体腔细胞多克隆抗体,可以用于研究刺参体腔细胞的发生。利用单克隆抗体技术,有望进一步研究不同种类体腔细胞之间的组织发生关系。


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