海洋弧菌（Vibrio sp.H）褐藻胶裂解酶的特性及对褐藻胶酶解产物的研究

【摘要】： 本文利用从威海近海天然腐烂的海带中分离得到褐藻胶降解菌株,以海藻酸钠为唯一碳源,通过培养、初筛、复筛后得到一株优势海洋弧菌(菌株Vibriosp.H),本菌株为革兰氏阴性、杆状、有鞭毛、可运动;该菌株为兼性厌氧,最适NaCl浓度为4%,最适生长温度为25℃,最适生长pH为6.5;判断为氧化酶反应阳性,发酵葡萄糖产酸不产气,对弧菌抑制剂敏感,不发光,不产色素;推断该菌株(Vibrio sp.H)属于弧菌科弧菌属(Vibrio sp.) 本论文对该褐藻胶裂解酶的性质进行了研究,得出该酶分子量约为56.2KD,酶比活力为123.23U/mg,最适温度为25℃,最适pH为6.5,酶动力常数Km值约为76.35g/L。由该裂解酶对金属离子作用中发现,含有EDTA和Zn~(2+)时,对(M)n段褐藻胶、(G)n段褐藻胶和褐藻胶有明显的促进作用,Ba~(2+)对(M)n段褐藻胶、(G)n段褐藻胶和褐藻胶有一定的抑制作用,Zn~(2+)对(M)n段褐藻胶有明显的促进作用。该裂解酶适宜褐藻胶底物浓度为3%,并且该酶对(M)n段褐藻胶中甘露糖醛酸降解效果较好。 选择合适的浓度褐藻胶底物,通过Vibrio sp.H裂解酶降解褐藻胶,获得不同产物嵌段组分Poly(M)和Poly(G),进一步研究Poly(M)和Poly(G)性质,得出以下结论: 外观性质上Poly(M)为白色的固体,水溶液为无色,PH为6.96;Poly(G)为淡黄色的固体,水溶液为淡黄色,PH为7.98。Poly(M)和Poly(G)的吸收分别在220～250nm处和230～250nm处;在可见处无吸收。Poly(M)和Poly(G)的炭化温度为226～285℃、236～275℃;旋光度都为左旋,约-0.5～-0.65之间。根据寡糖的电泳分析可见,该裂解酶对褐藻胶中Poly(M)的降解程度大于其对Poly(G)的降解程度。根据GPC分析,Poly(M)重均分子量为601,大约得到三聚体寡糖;Poly(G)的分子量3177,大约得到十六聚体多糖。由IR的结果分析可见,在940nm附近Poly(G)的特征吸收比Poly(M)的特征吸收强。