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三叉神经根区周围蛛网膜粘连与HSV-1感染关系的实验研究

胡庆雷  
【摘要】:目的原发性三叉神经痛病因复杂,其发病机制国际上存在许多学说,但没有一种学说能完全解释其病因。目前,在众多学说中,血管压迫学说得到了广大临床医师的认可,且显微血管减压术(Microvascular decompression,MVD)治疗三叉神经痛疗效确切,但仍有一少部分患者经MVD治疗后疗效欠佳。此类患者在术中多发现三叉神经根区的蛛网膜粘连较严重,粘连的蛛网膜包绕三叉神经根及周围的动脉,加剧了动脉对三叉神经根的压迫。经临床观察发现此类患者术后大多会在同侧三次神经分布区出现面部疱疹。据单纯疱疹病毒Ⅰ型(Herpes simplex virus-1,HSV-1)的生物学特性,考虑三叉神经根区的蛛网膜粘连与术后的面部疱疹的发生可能与HSV-1的感染有关。本实验目的是研究三叉神经痛患者三叉神经根区周围蛛网膜粘连与HSV-1感染的关系,从病毒感染引起蛛网膜粘连的角度分析病毒感染是导致三叉神经痛的病因之一,并为今后三叉神经痛的病毒病因的研究及临床治疗做参考。 方法实验组40例蛛网膜标本,取自山东省济宁市第一人民医院神经外科自2008年1月至2010年7月三叉神经痛患者MVD时,三叉神经根区明显粘连的蛛网膜。40例患者术后同侧三叉神经分布区出现面部疱疹的有17例,留取面部疱疹液。对照组20例蛛网膜标本,取自颅脑外伤患者的蛛网膜标本(桥脑小脑区)。每例蛛网膜分成三部分,分别做:(1)石蜡病理切片:将蛛网膜组织用10%中性福尔马林固定12小时,自动组织处理机梯度酒精脱水,二甲苯透明,浸蜡;石蜡切片机上连续切片厚度3um,选择完整、无划痕、厚薄均匀的蜡片2片,附在载玻片上烤片20分钟;再将切片经二甲苯脱蜡和梯度水化,依次经苏木素染色,氨水返蓝,伊红染色,梯度酒精脱水,二甲苯透明中性胶封固。(2)PCR检测蛛网膜及面部疱疹液内HSV-1特异性基因片段:组织破碎,提取总DNA,引物选取G+C含量约50%的无发卡结构,相互间无同源序列的两段特异保守序列,扩增片段为452bp。扩增产物在1.5%琼脂糖凝胶上电泳,加溴化乙锭等显色剂。(3)HSV-1单克隆抗体检测蛛网膜及面部疱疹液内特异性抗原的表达:蛛网膜组织提取总蛋白,沸水5分钟使蛋白变性,将蛋白移至配制好的SDS-PAGE凝胶上电泳,电泳结束后将蛋白转至硝酸纤维素膜上,脱脂牛奶封闭非蛋白结合位点,加鼠抗人HSV-1单克隆抗体过夜;加辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体充分结合,加显色剂显色。 结果实验组的蛛网膜病理切片中,光镜下见粘连的蛛网膜主要有6种病理变化:炎细胞浸润23例、组织水肿6例、玻璃样变性3例、病理性钙化1例以及粘液样变性7例。对照组的蛛网膜病理切片光镜下发现有1例轻度炎细胞浸润伴粘液样变性,有3例细胞轻度水肿,余均为正常蛛网膜结构。两组间病理变化情况Fisher’s精确概率计算p0.00。实验组40例蛛网膜标本中检测到HSV-1特异性基因片段者有29例,其阳性率为72.5%;7例检测到有HSV-1特异性抗原的表达,其阳性率为17.5%。即以潜伏感染为主,少部分呈增值性感染。17例实验组的患者术后面部水疱液内有15例检测到有HSV-1特异性DNA片段,12例检测到有HSV-1特异性抗原的阳性表达,即病毒多在增殖期。对照组有4例标本检测到HSV-1特异性基因片段,未检测抗原表达。卡方检验比较两组间病毒感染的阳性率有统计学意义(P0.05),且蛛网膜组织内有HSV-1感染病例与没有感染的病例其病理变化有统计学差异(P0.05)。 结论 1.单纯疱疹病毒Ⅰ型可以在蛛网膜内形成潜伏。 2.三叉神经根区蛛网膜的粘连与单纯疱疹病毒Ⅰ型的感染密切相关。 3.粘连的蛛网膜加剧了根区动脉对三叉神经根的压迫,是导致三叉神经痛的病因之一。 4.显微血管减压治疗原发性三叉神经痛可致潜伏感染的HSV-1再激活。


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