收藏本站
收藏 | 论文排版

禽白血病病毒J亚群、B亚群的分离鉴定及核酸探针的制备

刘功振  
【摘要】: 禽白血病(Avian Leukosis,AL)是由禽白血病/肉瘤病毒群病毒引起的禽类多种肿瘤性疾病的总称。禽白血病病毒群分为A、B、C、D、E、J等共10亚群。近年来,J亚群禽白血病在我国呈流行性爆发,对我国养禽业造成巨大的经济损失。目前,国内外尚无有效的疫苗和药物用于防治本病。世界各国控制禽白血病的主要措施是通过病原检测,淘汰阳性鸡,从而净化种群消灭本病。但由于禽白血病毒gp85基因极易发生抗原变动,现有ALV抗体检测试剂盒不能保证检测到所有中国株ALV抗体。基于此,建立适合我国ALV感染的快速诊断方法显得尤为必要。 本实验通过血清学ELISA、病理学以及病毒分离,获得ALV-B和ALV-J各两株分离株,并在国内首次从感染ALV-J的海蓝白商品蛋鸡群中分离到B亚群禽白血病病毒(ALV-B),同时证实了ALV-B、ALV-J在同一鸡只体内的混合感染。对该鸡场血清样品(92份)ELISA检测显示:ALV-A/B型抗体阳性率为16.3%,ALV-J抗体阳性率为13%,其中有1只鸡呈现抗体双阳性;病理组织学观察显示,在肝脏同一位置发现淋巴细胞样瘤细胞和髓细胞样瘤细胞增生灶,其它组织器官(除脑、神经和法氏囊)也有不同程度的两种瘤细胞增生;合成ALV-A、ALV-B、ALV-J、MDV和REV的特异性引物进行PCR检测,获得1100bp的ALV-B特异性片段和924bp的ALV-J特异性片段,而MDV和REV检测为阴性。在同一只鸡中出现ALV-B和ALV-J双阳性,分离得到ALV-B和ALV-J各两毒株;对ALV-B、ALV-J扩增序列进行遗传进化树分析表明,两ALV-B分离株与其代表株的同源性分别为92.8%和93.0%;两ALV-J分离株与英国原型株同源性分别为96.9%和91.5%,与美国原型株同源性为85.9%和81.5%,与国内分离毒株同源性在87.0%~98.7%之间。 基于ALV群内混合感染的出现,制备了通用探针和ALV-J核酸探针,运用斑点杂交方法对禽白血病B、J亚群和马立克氏病、网状内皮增生症进行检测诊断。根据GenBank中已经发表的ALV各亚群基因的序列,筛选比较各亚群gag基因和env囊膜基因,直接合成核酸探针的目的片段,利用随机引物法标记物地高辛(DIG)制备了ALV通用核酸探针和J亚群核酸探针;通过斑点杂交检测方法对此探针特异性进行验证,检测结果显示:该探针能与标准毒株ALV核酸发生特异性杂交,而与对照的未接毒DNA、禽网状内皮组织增生症病毒(REV)、马立克氏病病毒(MDV)核酸杂交反应为阴性,具有良好的特异性。特异性核酸探针的制备为我国ALV感染的快速诊断提供了新的思路和方法。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 凌育焱;禽白血病病毒研究新进展[J];畜牧兽医科技信息;1998年17期
2 靳艳玲;罗薇;;禽白血病研究进展[J];西南民族大学学报(自然科学版);2005年S1期
3 DrkongSonchiu,周剑峰;禽白血病病毒J亚群[J];山东家禽;1999年05期
4 冯小宇;徐镔蕊;Lucy F.Lee;Maoxiang Li;;蛋鸡J亚群禽白血病病毒的分离与初步鉴定[J];中国兽医杂志;2008年01期
5 孙淼;李金彩;郭振华;曹红;常建宇;陈福勇;;J亚型禽白血病病毒的分离与鉴定[J];中国兽医杂志;2009年10期
6 石文慧;韩新影;康亚男;卢军霞;吕蔚;杨润德;刘艳琴;;禽B型白血病病毒的分离及分子分型鉴定[J];动物医学进展;2010年10期
7 秦爱建,刘岳龙,周绮雯,黄维嘉;J亚群禽白血病病毒的免疫荧光检测效果[J];中国预防兽医学报;2001年03期
8 刘超男;;致血管瘤型J亚群禽白血病病毒的基因组序列分析[J];中国病理生理杂志;2010年10期
9 刘公平,赵振芬,刘福安;禽白血病病毒研究进展[J];中国兽医学报;2000年06期
10 刘公平,赵振芬,刘福安;A亚群禽白血病病毒囊膜基因gp85片段在大肠杆菌中的表达[J];中国病毒学;2001年03期
11 祝丽;张玲娟;孙磊;;禽白血病病毒与免疫抑制[J];中国动物检疫;2009年04期
12 蔡丽娅;秦爱建;;我国禽白血病病毒生物学特点及其控制[J];中国兽药杂志;2009年11期
13 秦爱建,崔治中,Lucy Lee,Aly Fadly;禽白血病病毒J亚群env基因的克隆和序列分析[J];中国病毒学;2001年01期
14 范书才;李虹;肖睿;;禽白血病-肉瘤病毒的RT-PCR检测[J];中国兽药杂志;2006年06期
15 范书才;李虹;肖睿;;禽白血病病毒分离鉴定[J];中国兽药杂志;2006年09期
16 侯磊;高宏雷;高玉龙;祁小乐;王笑梅;张淼涛;;ALV-J分离株Hrb-1 gp85基因蛋白的原核表达及多克隆血清的制备[J];黑龙江畜牧兽医;2009年08期
17 刘公平,赵振芬,刘福安;禽白血病病毒囊膜基因gp85片段的克隆与鉴定[J];中国预防兽医学报;2001年01期
18 秦爱建,LEE LUCY;禽白血病病毒J亚群重组囊膜蛋白基因的表达效果[J];中国兽医学报;2001年05期
19 刘公平,赵振芬,刘福安;禽白血病病毒p19基因末端片段在大肠杆菌中的表达[J];中国病毒学;2001年01期
20 杨玉莹,叶建强,赵振华,秦爱建,顾玉芳;禽白血病病毒J亚群内蒙株的分离与鉴定[J];中国病毒学;2003年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杨玉莹;叶建强;赵振华;秦爱建;顾玉芳;;禽白血病病毒J亚群内蒙株的分离与鉴定[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会鸡淋巴白血病防控技术研讨会论文集[C];2010年
2 刘功振;张洪海;刘青;邱波;王峰;王晓伟;陈洪博;成子强;;感染J亚群禽白血病病毒的蛋鸡群中检测出B亚群禽白血病病毒[A];中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会论文集(下册)[C];2010年
3 王彦军;孙淼;曹红;陈福勇;;禽白血病病毒自然感染及抗体变化动态规律[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
4 刘青;成子强;;禽白血病病毒跨膜蛋白在膜融合及免疫抑制中的作用[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会鸡淋巴白血病防控技术研讨会论文集[C];2010年
5 李中明;王景艳;张青婵;赵冬敏;崔治中;马诚太;王丽;;某进口蛋用型祖代鸡群禽白血病病毒感染状态的持续观察[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会鸡淋巴白血病防控技术研讨会论文集[C];2010年
6 周碧君;毛君婷;罗明星;王开功;文明;程振涛;;贵州省禽白血病病毒不同亚群感染情况调查研究[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
7 顾小雪;韩雪;蔡林;张硕;李晓霞;汪葆玥;遇秀玲;翟新验;;血管瘤型J亚型禽白血病病毒的分离与鉴定[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
8 王林山;尹燕博;徐守振;郭妍妍;吴珊珊;胡永新;;鸡J亚群禽白血病病毒与七种常见病毒混合感染调查[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
9 范书才;李虹;肖睿;;禽白血病病毒分离鉴定[A];中国畜牧兽医学会2003年学术年会论文集[C];2003年
10 王建新;崔治中;张纪元;王增福;陈本龙;王锡乐;;J亚群禽白血病病毒与禽网状内皮增生症病毒共感染对肉鸡生长和免疫功能的抑制作用[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会鸡淋巴白血病防控技术研讨会论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 赵冬敏;B亚群禽白血病病毒分离株的生物学特性[D];山东农业大学;2010年
2 张青婵;A亚群禽白血病病毒不同分离株的基因组和生物学特性比较[D];山东农业大学;2010年
3 张在平;荧光定量PCR检测禽白血病病毒与RNA干扰抑制J亚群禽白血病病毒复制的研究[D];内蒙古农业大学;2010年
4 付朝阳;J亚群禽白血病病毒分离株变异分析及重组抗原ELISA检测方法的建立[D];中国农业科学院;2004年
5 吴晓平;商品蛋鸡源J亚群禽白血病病毒分离株生物学特性研究[D];扬州大学;2010年
6 秦爱建;禽白血病病毒J亚群囊膜糖蛋白基因的生物学和生物化学特性[D];扬州大学;1999年
7 杨玉莹;J亚群禽白血病病毒内蒙株的分离鉴定及其部分分子生物学特性的研究[D];内蒙古农业大学;2003年
8 成子强;禽白血病病毒J亚群(ALV-J)内蒙株的建立及致瘤机理的研究[D];内蒙古农业大学;2002年
9 邱玉玉;A亚群禽白血病病毒单克隆抗体的制备和不同亚群禽白血病病毒共感染相互影响的研究[D];山东农业大学;2011年
10 邓小芸;网状内皮组织增生症病毒LAMP检测方法及感染性分子克隆的建立[D];东北农业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 朱美真;山东某地方品系鸡鸡胚中禽白血病病毒的分离及序列分析[D];山东农业大学;2010年
2 张悦;禽白血病病毒B、E和J亚群基因芯片检测方法的建立[D];河北农业大学;2012年
3 石文慧;禽B型白血病病毒生物学特性的分析及研究[D];河北农业大学;2010年
4 朱钰峰;地方品系蛋鸡群中禽白血病病毒的鉴定和J亚群禽白血病病毒受体蛋白的分离[D];扬州大学;2011年
5 吕佳泓;鸭群中禽白血病病毒的核酸检测[D];山东农业大学;2014年
6 李传龙;J亚群禽白血病病毒相关的鸡急性纤维肉瘤人工造病试验[D];山东农业大学;2012年
7 刘功振;禽白血病病毒J亚群、B亚群的分离鉴定及核酸探针的制备[D];山东农业大学;2010年
8 辛敬凯;B亚群禽白血病病毒单克隆抗体的制备[D];山东农业大学;2014年
9 康忠惠;A、B亚群禽白血病病毒LAMP检测方法的建立及初步应用[D];东北农业大学;2011年
10 刘丽娜;J亚群禽白血病病毒gp85基因的克隆表达及初步应用[D];华中农业大学;2012年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978