J亚群禽白血病病毒相关的鸡急性纤维肉瘤人工造病试验

【摘要】：禽白血病病毒（Avian Leukosis Virus，ALV）是以引起禽各种造血细胞肿瘤性增生为特征的一类反转录病毒群，其中能感染鸡的可分为A、B、C、D、E和J6个亚型，临床上常见的为A、B和J亚型，而C、D亚型在临床上相对少见，E亚群主要以前病毒的形式存在于宿主基因组而广泛存在。ALV-J是1988年英国Campton动物保健协会首先分离得到的。近几年在我国已先后从商品肉鸡、蛋鸡、麻鸡中发现ALV-J，最近从临床血管瘤病例中也分离到ALV-J。早在100年前，就已发现了鸡的急性肉瘤，后来证明是由与ALV-A或ALV-B相关的带有肿瘤基因的急性ALV引起，其细胞类型是一种纤维细胞瘤，但一直没有ALV-J相关的急性纤维肉瘤的报道。本研究从30多日龄817肉杂鸡颈部疑似纤维肉瘤中分离到一株ALV-J，该ALV作为辅助病毒能在较短时间诱发急性纤维肉瘤，对其致病性进行了研究。 1攻毒用病料来源与病毒制备 由山东农业大学动物科技学院家禽肿瘤病研究室于2010年从山东某鸡场30多日龄颈部皮下出现肉瘤的817肉杂鸡个体中采集到。本研究中，首先将在-80℃保存的肉瘤组织与无菌生理盐水按1：5（质量体积比）研磨成悬液，然后以12000r/min，离心10min后，再用0.22m滤器过滤获无细胞滤液。病料过滤液直接接种实验鸡或接种于DF1细胞用于病毒分离或增殖。 2人工感染诱发的急性纤维肉瘤眼观病变 病毒引起的鸡产生的急性纤维肉瘤主要附着在攻毒部位皮下，将完整的大肿瘤切开后，可以看到许多大小不同且相互独立的次级纤维肉瘤结节。 3病理组织学观察 病理组织学观察，所有肉瘤都表现类似的病理组织学变化。在肉瘤组织不同的区域,表现不同的细胞类型，即使在同一切片中甚至同一视野的不同部位，也可能存在不同类型的细胞。有的区域细胞主要呈椭圆形或梭形或不规则形，但大部分区域是呈细长的两端尖状的典型的纤维细胞。在肿瘤内，纤维细胞呈束状排列，细胞核形状不一，有圆形、长圆形、不规则形状，胞核大小不一。有的胞核似有分裂现象。 4不同注射部位接种病料滤过液 采用颈部皮下、胸肌、腹腔为接种部位，分别于1日龄以0.2ml/只的剂量将病料滤过液接种经棉拭子P27抗原检测和血清抗体检测呈阴性的817肉杂鸡。结果显示：颈部皮下、胸肌、腹腔三个部位攻毒鸡的肿瘤发生率分别为100%（20/20）、95.2%（20/21）、100%（20/20）。 5不同品种鸡接种病料滤过液 试验选取棉拭子P27抗原检测和血清抗体检测呈阴性的1日龄白羽肉鸡，海兰褐，SPF鸡，817肉杂鸡4个品种鸡，分别于1d以0.2ml/只的剂量采用腹腔接种新鲜肿瘤组织研磨。结果显示：白羽肉鸡、海兰褐、817肉杂鸡和SPF鸡急性纤维肉瘤率分别为78.3%、63.2%、85.0%、90.0%。 6不同剂量病料滤过液接种 实验以棉拭子P27抗原检测和血清抗体检测呈阴性的1日龄817肉杂鸡和SPF鸡为对象，首先将未经稀释的病料滤过液及其1：10、1：100、1：1000、1：10000和1：100000的稀释液以0.2ml/只的剂量颈部皮下接种817肉杂鸡和SPF鸡。结果显示：病料过滤液病料滤过液直接接种817肉杂鸡和SPF鸡的肿瘤发生率均为100%（10/10），10倍稀释后攻毒鸡的肿瘤发生率分别为80%（8/10）和100%（10/10），100倍稀释后攻毒鸡的肿瘤发生率分别为100%（10/10）和80%（8/10），1000倍稀后攻毒鸡的肿瘤发生率分别为40%（4/10）和50%（5/10），更高倍数稀释后攻毒鸡没有肿瘤发生。 7细胞培养上清液接种鸡 将病料滤过液接种DF-1细胞的上清液接种6只1日龄817肉杂鸡，每只颈部皮下接种0.2mL。结果显示：细胞培养上清造成33.3%（2/6）的817肉杂鸡发生肉瘤。