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桂花幼胚培养与愈伤组织诱导及分化

韩瑞超  
【摘要】:本研究选用‘大花金’桂(Osmamthus fragrans 'Dahua Jin')、‘籽银’桂(Osmanthusfragrans 'Zi Yin')、‘籽丹’桂(Osmanthus fragrans 'Zi Dan')三个品种作为实验材料,探索桂花幼胚离体培养、愈伤组织诱导和愈伤再分化的适宜条件,为构建桂花再生体系积累经验。 在幼胚培养实验中,对外植体消毒时间、基本培养基种类、外源激素浓度和比例分别设计了不同梯度,探索幼胚适宜的萌发条件。在生根实验中,对试管苗根部进行不同程度断根处理,探索根部损害、不同浓度的NAA对试管苗生根的影响。在炼苗移栽实验中使用河沙、蛭石、草炭土作为基质,观察不同基质对试管苗的长势的影响。在愈伤组织诱导和愈伤再分化试验中,对接种方式、光照条件、外源激素的种类、浓度和比例等方面进行不同设计,观察这些因素对愈伤组织诱导和再分化的影响。对实验结果使用DPS数据处理系统进行分析。主要的研究结果如下: 1.桂花3月中旬采集的未成熟种子合适的升汞消毒时间是3min~6min。 2.从萌发率和长势上看,B5培养基比MS培养基更适合幼胚培养。‘大花金’桂合适的幼胚培养基是B5+GA(3mg/L)+6-BA(1mg/L)‘;籽银’桂合适的幼胚培养基是B5+GA(2mg/L)+6-BA(2mg/L);‘籽丹’桂合适的幼胚培养基是B5+GA(1mg/L)+6-BA(1.5mg/L)。 3.切断主根,并添加NAA(2mg/L)有利于促进侧根萌发。 4.幼叶腹面朝上和背面朝上两种接种方式对愈伤组织诱导率没有明显影响。 5.诱导愈伤培养初期经过一段时间的黑暗培养,对于提高愈伤组织诱导率和降低外植体褐化率效果明显。光照对愈伤的增殖无明显影响,对愈伤疏松程度也没有明显影响。光照能够使愈伤产生较多绿色,黑暗条件下愈伤绝大多数为白色或者浅黄绿色。 6.单独添加6-BA或者单独添加2,4-D都不利于幼叶诱导愈伤。同时添加6-BA和2,4-D能够促进愈伤增殖,产生比添加6-BA和NAA更多的愈伤,产生的愈伤多数较疏松,失绿情况较重,培养超过50天后褐化情况严重。同时添加6-BA和NAA能够促进产生愈伤,产生的愈伤较致密,多数为浅绿色和绿色。比较适合‘籽银’桂幼叶愈伤组织诱导的合适的培养基是MS+6-BA(2mg/L)+NAA(0.3mg/L)、MS+6-BA(3mg/L)+NAA(0.5mg/L)和MS+6-BA(5mg/L)+NAA(0.5mg/L),愈伤组织诱导率在90%以上。 7.炼苗移栽过程要注意保持水分充足,基质以草炭土为宜。


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