收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

中国株J亚群禽白血病病毒全基因组序列的测定与分析

吴永平  
【摘要】:J亚群禽白血病病毒(Subgroup J of Avian leukosis viruS,ALV-J)是90年代初由英国鉴定出来的禽白血病病毒(ALV)新的亚群,主要引起肉鸡的骨髓瘤白血病。近年来该病毒在世界范围内迅速传播。我国于1999年首先在肉用型鸡群中分离鉴定出了ALV-J的中国株(杜岩,崔治中等,1999),并通过接种1日龄雏鸡发现了一株急性转化型毒株。此后,又在中国分离出了更多的毒株(张志,崔治中等,2002)。 网状内皮组织增殖病(reticuloendotheliosis,RE)是指由网状内皮组织增殖病病毒(ReticuloEndotheliosis virus,REV)引起的一群病理综合症。根据病原分离和血清学的结果,表明REV是呈世界性分布的。REV不仅能引起感染禽只生长迟缓、废弃淘汰率升高和死亡,还能引起感染鸡的免疫抑制。 本研究共进行了三个试验。试验1,运用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction PCR)方法扩增并克隆了在中国分离得到的反转录病毒J亚群禽白血病病毒NX0101株的前病毒全基因组序列并完成了序列测定,并与已发表的ALV-J的病毒序列进行比较。根据已报道的ALV-J前病毒基因组序列设计了8对重叠引物,通过PCR方法扩增出ALV-J/NX0101株的不同cDNA片段,分别克隆到DMD18-T载体中,转化受体菌TG1,酶切鉴定阳性克隆,并对阳性克隆测序,最后拼接出NX0101株的全基因组核酸序列。试验2,探索了对REV特异性的杂交瘤细胞株11B154的最佳生长和抗体分泌条件。以每毫升培养液中平均含0.65×10~6个/ml活细胞起始,于37℃下在含7%CO_2的培养箱中继续培养。在24、48、72和96小时后,每毫升培养液平均总细胞数和活细胞数(百分比)分别是:1.13×10~6和1.03×10~6(活细胞占94.5%)、3.42×10~6和2.48×10~6(活细胞占72.5%)、2.6×10~6和0.98×10~6(活细胞占37.7%)及2.47×10~6和0.53×10~6(或细胞占21.5%)。同时用细胞培养上清液对REV感染的鸡胚成纤维细胞作间接荧光抗体试验,在培养24、48、72和96小时后上清液中平均抗体效价分别是1:67、1:133、1:67及1:33。试验3,为了模仿REV垂直感染鸡胚,在1和3日龄的发育SPF鸡胚人工接种不同剂量的REV,并继 山东农业大学硕士学位论文 续孵化至12日龄。将发育鸡胚制成成纤维细胞单层后,再用抗REV单克 隆抗体11Bll8作间接荧光抗体反应检测REV。 试验1结果表明,该毒株的cDNA基因组有7682个碱基,共编码2560 个氨基酸。ALv一J的主要基因和基因组功能片段是5’LTR、gag基因、pol 基因、env基因、3’LTR,上述各个基因产物及基因组功能片段又包括若 干个亚片段。本研究将中国野毒株Nxo 101与英国病毒株HPRS一103及美国 病毒株 ADOL一7501的各基因片段做了比较(NX0101与HPRS一103、NX0101 与ADOL一7501、HPRS一103与ADOL一7501,以下比较均按此顺序)。5’LTR 的核甘酸序列同源性为96.6%、92.9%、93.8%。5’LTR区由U3、R、 U5构成,对这三个基因片段进行比较,其同源性分别为94.6%、89.7%、 93.8%;100%、100%、100%;95.0%、95.0%、92.5%。5’UTR的核 甘酸序列同源性为95.8%、95.0%、94.7%。 gag基因的氨基酸序列同源性为94.7%、94.7%、99.9%。gag基因 负责编码病毒内部结构核衣壳蛋白,主要有:p19、pZ、plo、p27、plZ、 p15。对gag基因的不同编码产物与即RS一103和ADoL一7501的相应基因序 列作比较,其同源性分别为96.1%、92.9%、94.2%;100%、100%、 100%;96.8%、98.4%、98,4%;94,1%、95.0%、97.1%;93.3%、 92.1%、95.5%:96.0%、96.0%、98.4%。 pol基因编码一种反转录酶,其氨基酸序列同源性为97.7%、97.6 %、98.6%。pol基因的编码产物是RTp68和IN p32。对pol基因的不同 编码产物做了比较,其同源性为97.2%、97.6%、99.0%;98.9%、97.5 %、98.6%。 囊膜蛋白env基因的同源性为91、8%、86.5%、87.6%。env基因由 gp85基因和gp37基因组成,对其氨基酸序列作比较,同源性为90.3%、 80.1%、83.1%:93.4%、94.4%、91.9%。 3’LTR的核甘酸序列同源性为95.0%、90.6%、94.2%。3’LTR区 由U3、R、US构成,对这三个基因片段进行比较,其同源性分别为%.0 %、90.7%、93.8%;100%、100%、100%; 91.7%、91.7%、93.6%。 3’UTR基因的核甘酸序列同源性为84.5%、64.8%、91.4%。3’UTR 基因包括DRI基因和E二X基因。通过比较发现,NX0101毒株的DRI区 吴永平中国株J亚群禽自血病病毒全基因组序列的测定与分析 缺失62个碱基,E二X基因缺失65个碱基。由以上分析可知,我国 ALV一J/N XO 101株的基因组全序列基本类似于已发表的其它ALv一J病毒株。 在比较的三个毒株中,NX0101株与HRPS一103和ADOL7501毒株并不呈现 同步变化。ALV一J/NX0101株前病毒全基因序列的测定,这为进一步研究 和追踪我国鸡群中ALV一J的演变规律提供了基本的分子数据,也有助于了 解中国流行毒株与国际上其他流行株间的演化关系。 试验2结果表明,以培养48小时后,当细胞总数及活细胞总数最高但 活细胞百分比开始下降时的培养液中抗体效价最高。该研究结果可作为在 细胞培养上大批量生产抗REV单抗的技术参数。 试验3结果表明,从所有人工感染尺EV的鸡胚12日龄制备的成纤维细 胞


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 ;中国科学家完成3种病原微生物全基因组序列[J];现代临床医学生物工程学杂志;2002年01期
2 ;我国首次完成益生乳酸菌全基因组序列测定[J];中国牧业通讯;2008年12期
3 ;蚂蚁全基因组序列图成功绘制[J];广东农业科学;2010年09期
4 陈瑜;;首个甲虫全基因组序列问世[J];农药市场信息;2008年10期
5 河川;;我国首个乳酸菌全基因组序列测定完成[J];食品科技;2008年07期
6 ;牡蛎全基因组序列图谱绘制完成[J];东北农业大学学报;2010年08期
7 ;朱鹮全基因组序列图谱绘制完成[J];中国家禽;2011年08期
8 ;世界首例蒙古族人全基因组序列图谱绘制完成[J];科技传播;2012年01期
9 谢芝勋;唐小飞;董建宝;刘加波;庞耀珊;邓显文;谢志勤;;三株新城疫广西分离株全基因组序列的测定与分析[J];Virologica Sinica;2006年03期
10 林燕清;朱礼倩;陶洁;孙宏进;孟祥升;王建业;朱国强;;牛病毒性腹泻病毒基因2型代表株全基因组序列分析[J];中国预防兽医学报;2011年01期
11 ;我国绘制完成世界首个鹅全基因组序列图谱[J];广东农业科学;2011年11期
12 刘晓林;陶泽新;王海岩;刘尧;宋立志;纪峰;王同展;林小娟;王素婷;徐爱强;;人类肠道病毒74型山东地方株的全基因组序列分析[J];病毒学报;2013年04期
13 ;我国科学家成功测定白鱀豚全基因组序列[J];海洋世界;2013年12期
14 王文成;边少国;舒秀伟;陆承平;;猪繁殖与呼吸综合征病毒国内分离经典株与变异株的全基因组序列分析[J];畜牧与兽医;2008年07期
15 朱小甫;吴旭锦;;古典猪瘟病毒全基因组序列研究进展[J];上海畜牧兽医通讯;2011年02期
16 陈智伟;姚栩;张彩云;杨建娜;郑能雄;;甲型H1N1流感(2009)病毒福州株全基因组序列分析[J];中国卫生检验杂志;2011年08期
17 ;世界首部藏羚羊全基因组序列图谱宣告绘制完成[J];青海医学院学报;2009年04期
18 曾培龙;王亚东;;全基因组序列拼接研究进展[J];智能计算机与应用;2012年04期
19 宋振辉;郭万柱;;猪传染性胃肠炎病毒的分离鉴定及全基因组序列分析[J];病毒学报;2008年05期
20 于俊勇;徐廷川;张得玉;罗玉钧;何逸民;张桂红;;广东省猪圆环病毒2型全基因组序列的比较和分析[J];华南农业大学学报;2011年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 朱明;刘薇;陈金顶;;三株特殊猪乙脑病毒全基因组序列研究[A];2012年鄂粤微生物学学术年会——湖北省暨武汉微生物学会成立六十年庆祝大会论文集[C];2012年
2 魏雪涛;李银;刘宇卓;张敬峰;;一株鹅源副粘病毒分离株全基因组序列的克隆与序列分析[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集(下册)[C];2009年
3 朱向东;王永山;欧阳伟;潘群兴;毕振威;李月华;范红结;王笑梅;;传染性法氏囊病病毒自然重配株全基因组序列分析[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会论文集[C];2013年
4 杨汉春;黄芳芳;郭鑫;高云;李华;陈声;;猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)BJ—4株全基因组序列测定[A];第四届中国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2001年
5 宋振辉;郭万柱;;猪传染性胃肠炎病毒的分离鉴定及全基因组序列分析[A];中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第六届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2008年
6 王伟伟;刘秀梵;;四株鸽源NDV的生物学特性鉴定及其全基因组序列分析[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会论文集[C];2008年
7 李潭清;宋勤叶;左玉柱;李俊格;;PCV2河北株的分离鉴定及其全基因组序列分析[A];京津冀畜牧兽医科技创新交流会暨新思想、新观点、新方法论坛论文集[C];2008年
8 宋勤叶;马增军;左玉柱;李潭清;李俊格;;PCV2河北株的分离鉴定及其全基因组序列分析[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会论文集[C];2007年
9 佘利旋;贾坤;李守军;;犬流感病毒的分离鉴定与全基因组序列测定[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年
10 于晓庆;兰玉菲;王红艳;竺晓平;李向东;;马铃薯X病毒山东费县分离物的全基因组序列测定及分析[A];中国植物病理学会2007年学术年会论文集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 刘丽娜;基于全基因组序列分析筛选猪链球菌2型保护性抗原及其实验验证[D];第三军医大学;2008年
2 陈建飞;猪流行性腹泻病毒全基因组序列分析及感染性cDNA克隆的构建[D];中国农业科学院;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王长松;猪嵴病毒全基因组序列分析及荧光定量PCR检测方法的建立[D];上海交通大学;2013年
2 孔聪聪;三株传染性喉气管炎病毒全基因组序列测定及分析[D];中国农业科学院;2013年
3 叶剑波;上海近郊某地区犬Torque Teno virus感染率调查及全基因组序列分析[D];上海交通大学;2011年
4 高灵茜;NDV 7793野生株的纯化、毒力测定及全基因组序列测定[D];广西医科大学;2010年
5 林雨晨;猪嵴病毒WUH1株全基因组序列分析及病毒的分离[D];华中农业大学;2013年
6 王戬;三株不同禽源新城疫病毒的全基因组序列测定与分析[D];南京农业大学;2012年
7 杨哲;肠道病毒71型广西分离株全基因组序列测定与分析[D];广西医科大学;2010年
8 孙初阳;鸡传染性支气管炎病毒ck/CH/LNM/091017株全基因组序列分析及弱毒疫苗对其保护性的研究[D];东北农业大学;2010年
9 于作;牛腺病毒3型中国分离株的鉴定及全基因组序列分析[D];中国农业科学院;2011年
10 吴永平;中国株J亚群禽白血病病毒全基因组序列的测定与分析[D];山东农业大学;2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 李慧;首个鲤鱼全基因组序列图谱完成[N];光明日报;2014年
2 水科;鲤鱼全基因组序列图谱绘制完成[N];中国渔业报;2014年
3 通讯员 王静思 记者 刘传书;朱鹮全基因组序列图谱绘制完成[N];科技日报;2011年
4 记者 鸣琦 实习生 刘露;朱鹮全基因组序列图谱绘制完成[N];陕西日报;2011年
5 陈瑜;首个甲虫全基因组序列问世[N];科技日报;2008年
6 记者 高平;我国绘制完成首个蒙古族人全基因组序列图谱[N];光明日报;2011年
7 记者 仇逸;上海完成甲感病毒全基因组序列测定[N];新华每日电讯;2009年
8 记者 于嘉 张云龙;我国绘制完成世界首个蒙古族人全基因组序列图谱[N];人民日报;2011年
9 记者 于嘉 张云龙;首个蒙古族人全基因组序列图谱绘成[N];新华每日电讯;2011年
10 于嘉 张云龙;我国绘制世界首个蒙古族人全基因组序列图谱[N];西部时报;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978