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超临界CO_2/超声波强化萃取-高速逆流色谱纯化技术的集成及其在生物活性成分研究中的应用

王晓  
【摘要】:提取、分离植物中的有效成分是进行合理组方、药理药效、结构鉴定等研究的必要前提,也是中药现代化的最关键步骤。本研究探讨了快速寻找高速逆流色谱条件的方法步骤;建立了超临界萃取/超声波强化萃取做前期提取,大孔树脂预纯化、高速逆流色谱做分离纯化,高效液相色谱做最终的分离分析与鉴定的技术流程,该技术流程可用于植物活性成分的制备、中药指纹图谱研究、中药的质量监测等方面;并利用该技术系统研究了我省宝贵资源牡丹花,为其进一步的开发利用奠定了基础。主要结果如下: 1、以较低极性的化合物和厚朴酚、厚朴酚以及高极性化合物牛蒡子苷为例,研究建立了快速寻找不同极性的高速逆流色谱溶剂系统的方法和步骤:①首先预测要分离物质的极性,粗选几个溶剂体系,观察两相分层时间和两相之间的比例,两相分层时间以不超过60s,两相的比例大体接近为宜。②其次,通过薄层层析(TLC)进行预试验,观察目标化合物在两相间的分配,缩小选择范围。③然后,进一步利用HPLC测定K,并计算容量因子,尤其是分离两个或多个化合物时,HPLC尤为适合。④最后,利用优选到的合适的溶剂系统,先用少量的样品,较高速度进行预分离,然后再通过调整速度进行制备性分离。和厚朴酚、厚朴酚、牛蒡子苷进行了制备分离条件为:分离厚朴提取物的两相溶剂系统为正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水(1:0.4:1:0.4,v/v),进样量为500mg,在2.5h内,一次分离得到265mg纯度为99.2%和厚朴酚与150mg纯度为98.2%厚朴酚,成功实现了多次上样分离。分离牛蒡子提取物的两相溶剂


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