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绿色木霉对丝核菌的生防机制及木霉生防制剂研究

杨勇  
【摘要】:本论文系统研究了绿色木霉(Trichoderma viride Per. et Fr.)TCS-1 菌株对丝核菌的拮抗机制及其对小麦生长的影响。在对竞争作用、重寄生作用和抗生作用研究的基础上,进一步在致病酶的水平上进行了研究。对丝核菌胞外多聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase,PG)的活性进行研究,明确了TCS-1 对PG 活性的抑制效果。证实了TCS-1 对小麦防御酶系、小麦叶绿素含量和小麦生长的影响。利用正交试验的方法对发酵条件进行优化,确定了最优的发酵条件。 通过对峙培养初步筛选出8 个优势木霉菌株,将8 个木霉菌株与丝核菌AG-D 融合群的三个菌株WK-47、WK-141、WK-160 和AG1-ⅠA 融合群的菌株YW-2 进行对峙培养,通过比较寄生、竞争和抗生三种综合的拮抗作用效果筛选出最优拮抗菌株TCS-1。初步鉴定TCS-1 属于绿色木霉,TCS-1 代谢产物对丝核菌具有明显的抑制作用。通过正交试验,进一步确定了TCS-1 菌株的最优发酵条件,发酵条件为:碳源为红糖,氮源为硫酸铵,无机盐为硫酸镁,碳氮比为4/6,pH 值为5,培养温度为27.5℃,培养时间为6d。 在光照培养箱培养和温室培养两种条件下,绿色木霉菌TCS-1 都能有效的促进小麦生长,在株高和鲜重两个指标中,对株高的影响不显著,而对鲜重显著提高。经过TCS-1 处理的小麦叶片颜色加深,呈现深绿色,主根变粗,侧根增多且发达。叶绿素含量测定表明,绿色木霉TCS-1 能显著提高小麦体内叶绿素a 的含量,而对于叶绿素b 含量的影响不显著,叶绿素总量显著提高。 酶活性测定表明,不同浓度的TCS-1 菌株发酵液对小麦苯丙氨酸解氨酶(Phenylalanine ammonia-lyase PAL)、过氧化物酶(Peroxidase POD)、多酚氧化酶(Polyphenol oxidase PPO)和几丁质酶(Chitinase)的活性有不同程度的影响,4 种酶在经过发酵液处理后都会出现1 个活性高峰,最大酶活分别比对照高出2.2 倍、5 倍、2.5 倍和2.5 倍。个别浓度使POD、PPO 和Chitinase 的活性先降低后增高,这表明发酵液对酶调控的程序性。 DNS 法测定结果表明,双核禾谷丝核菌(Rhizoctonia cerealis Vander


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