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J亚群白血病病毒NX0101株感染性克隆化病毒的构建及其生物学特性

张纪元  
【摘要】:J亚群禽白血病病毒(Subgroup J of Avian leukosis virus,ALV-J)是90年代初鉴定出来的禽白血病病毒(ALV)新的亚群,主要引起肉鸡的骨髓瘤白血病。在随后几年中该病毒曾在世界范围内迅速传播。1999,我国也在肉用型鸡群中分离鉴定出了ALV-J的中国株。 ALV-J复制周期中存在前病毒形式,它可整合进宿主细胞基因组中。J亚群白血病病毒NX0101株是2001年从宁夏回族自治区某父母代种鸡场分离到。采用PCR方法分3段扩增出J亚群白血病病毒NX0101株的前病毒cDNA,PCR产物经克隆后顺次连接,获得一个含有完整NX0101株ALV-J前病毒cDNA的重组质粒,命名为pALV-J-NX。将pALV-J-NX DNA纯化后转染鸡胚成纤维细胞,以针对ALV-J的单克隆抗体JE9对转染后的细胞作间接免疫荧光反应,证明获得了具有感染性的病毒。该分子克隆化病毒rNX0101感染的CEF培养上清液中的半数组织感染量(TCID_(50))可达到10~(5.16)TCID_(50)/mL。 分别在SPF鸡制备NX0101株和rNX0101株的单因子血清,病毒中和反应表明:两种病毒之间抗原性的同源性为100%。这是我国第一株ALV-J的感染性分子克隆。 肉鸡致病性试验选用150只健康肉用型鸡,随机分为3组,每组50只,分别于1日龄经腹腔接种原始种毒NX0101株、rNX0101株和相应量的灭菌生理盐水作为对照。试验期为120天。通过临床观察和定期称重来比较rNX0101和NX0101感染对肉鸡的生长性能的影响。通过测定肉鸡常规免疫后血清中新城疫抗体和传染性法氏囊抗体的变化来比较rNX0101和NX0101感染后肉鸡的体液免疫功能的影响程度,同时比较了原始野毒与分子克隆化病毒对中枢免疫器官的影响,此外还通过免疫器官的病理组织学变化以及病变组织中病毒的再分离对rNX0101作了进一步研究。研究结果表明: 1 接种rNX0101组和接种NX0101组肉鸡生长发育受阻,与对照组相比,体重下降极显著(P0.01),法氏囊和胸腺明显萎缩,法氏囊指数和胸腺指数明显下降(P0.05);但两组之间的差异不显著。


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