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绵羊卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎体外培养的研究

孙桂金  
【摘要】:本实验旨在优化绵羊卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎体外培养体系,进一步推动胚胎生物工程的发展。为此,从屠宰场收集绵羊卵巢,采集卵巢表面直径2~6 mm卵泡卵母细胞,以TCM199添加10%FBS为基础液,对其进行成熟培养,研究FSH/LH浓度、动物年龄、季节、卵巢运输的保存温度对绵羊卵母细胞体外成熟的影响;绵羊成熟卵母细胞与绵羊冻精进行体外受精,研究受精体系、成熟卵母细胞受精前的处理方法对绵羊卵母细胞体外受精的影响;成熟卵母细胞在5 μmol/LA_(23187)和2 mmol/L 6-DMAP中孤雌激活后,以mSOF为基础培养液对胚胎进行体外培养,研究氨基酸和半胱氨对绵羊胚胎体外发育的影响。结果表明: 1.FSH/LH能促进绵羊卵母细胞体外成熟,适宜的添加浓度很重要;本实验条件下,添加量以10 μg/ml为宜。 2.成年绵羊卵母细胞成熟率高于性成熟前绵羊,但无显著差异。发情季节绵羊卵巢较乏情季节采集到更多的卵母细胞,但无显著差异;发情季节绵羊卵母细胞较乏情季节易成熟。 3.本实验条件下,绵羊卵巢运输保存温度以28~32℃为宜。 4.BO受精体系较TALP受精体系适合绵羊卵子卵裂。本实验条件下进行体外受精,除去大部分扩散卵丘细胞利于卵裂。 5.氨基酸能促进绵羊胚胎体外发育;0~24h培养添加氨基酸对卵母细胞的卵裂有抑制作用;24h后培养添加比全过程培养添加更能促进


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