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三种园林树种再生体系的建立及抗寒基因转化方法的研究

孔青  
【摘要】: 本研究以常见的园林树种女贞、泡桐和香樟为研究对象,研究了每一树种的不同激素浓度配比对其愈伤组织、芽和根诱导的影响。优化了三种常见园林树种的再生条件,获得了高效再生体系。再生结果表明,树种泡桐和香樟的再生能力明显高于树种女贞,并筛选出三种树种诱导愈伤组织、芽和根的最佳培养基。 以女贞的种子、带腋芽的茎段为外植体,诱导植株再生,建立高效植株再生体系,并为下一阶段的转基因工作做准备。实验获得胚萌发、诱导茎段分化生长、愈伤组织、芽和根的最佳培养基。以6-BA (0.5mg/l)+NAA (0.1 mg/l) +GA (0.1 mg/l)MS培养基,胚萌发的速度最高, 6-BA2.0+NAA0.02的MS培养基茎段分化生长效果最佳。 以北方抗寒香樟为试材,建立无菌外植体,筛选出侧芽分化最佳培养基MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L,继代最佳培养基为MS+5.0mg/LBA+1.0mg/LIBA,同时进行了叶片再生分化试验研究。 通过正交试验,从9个不同浓度的NAA、BA和IBA组合的MS培养基中,找出了泡桐叶片、茎段及茎段愈伤组织诱导芽分化最适培养基分别为MS+6-BA(2㎎/L)+NAA(0.2㎎/L)+IBA(0.1㎎/L),MS+6-BA(1㎎/L)+IBA(0.1㎎/L),MS+6-BA(1㎎/L)+ NAA(0.1㎎/L)+IBA(0.05㎎/L)。 在建立起三种常见园林树种再生体系的基础上,主要先对女贞进行了抗寒基因的遗传转化,利用三种转基因方式,农杆菌介导的遗传转化法、利用氮离子注入技术转化基因法以及花粉管通道法。 把经抗性素筛选得到的转基因苗通过PCR扩增表明,转基因植株中可以检测出有目的基因的存在,证明目的基因已成功插入到女贞的基因组中。


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