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转移因子纳米脂质体的制备及临床效果研究

王桂花  
【摘要】: 通过转移因子纳米脂质体的制备与抗病毒效果研究,为临床病毒性疾病提供新的防治手段和方法,为解决动物食品安全问题提供新途径。 本实验通过采集健康的肉仔鸡脾脏,透析法制备非特异性TF,冷冻干燥制成冻干粉,稀释,经检测TF稀释液蛋白反应阴性、多肽含量大于0.1mg/ml、OD_(260)/OD_(280)为2.39,含有17种氨基酸。结果与资料报道TF质量控制标准相一致。 采用逆相蒸发法,通过正交试验设计,以包封率为优选指标,确定TFNL的最佳制备方案。并在电镜下观察最佳方案制备的TFNL形态,检测包封率,不同时间的渗透率及电镜下的融合情况。结果显示最佳方案为:卵磷脂/胆固醇(摩尔比)为2:1,TF浓度为6mg/ml,吐温-80为1ml,有机相/水相(体积比)为4:1。电镜下大部分脂质体粒径小于100nm,分布均匀,包封率高达49.5%。随放置时间延长,TFNL颗粒发生融合,渗透率增加,但渗透速度并没有加快,到4.5个月是渗透率已达52.4%。电镜观察及渗透率结果显示,脂质体具有一定的稳定性,保质期确定为4.5个月。 通过生物学试验检测TFNL的安全性、热源性、过敏性,E-玫瑰花环试验和巨噬细胞吞噬试验检测对细胞免疫的影响。结果显示:TFNL无毒、无热源性、无过敏性,E-玫瑰花环结花率升高,巨噬细胞吞噬现象明显,说明TFNL具有促进细胞免疫功能。 通过给小鼠口服,然后取实验组与对照组小鼠的同段小肠,HE染色光镜下观察,做超薄切片电镜下观察。结果显示:实验组小鼠的小肠绒毛表面和根部有明显的TFNL颗粒,而对照组中有极少数脂滴出现。说明脂质体包被TF后可以使TF避免胃酸酶的降解,并且在肠道内吸收良好。 采用改良寇氏法测定TFNL防治病毒病的半数有效浓度,而后进行抗病毒试验:将鸡分组免疫、口服药物,后攻NDV,进行临床症状、抗体变化、死亡率、镜下病变等相关指标检测。结果显示:ED50为0.07mg/ml,临床浓度为0.14 mg/ml;TFNL抗NDV效果:各试验组均具有不同程度的抗病毒作用,而TFNL与疫苗合用抗病毒效果最好,TF与疫苗合用组其次,疫苗组次之。 TFNL治疗人工感染REV后发病的鸡,结果显示:TFNL的应用减缓了疾病进程,具有一定的积极作用,但病鸡最后还是以死亡告终。说明TFNL对REV有一定治疗意义,但临床应用的价值不大。 本研究表明TFNL无毒、无副作用,性质稳定,保质期为4.5个月,肠道内吸收良好;非特异性TFNL作为疫苗佐剂显示了强大的抗病毒作用。因此,TFNL作为疫苗佐剂在生产实践中具有巨大的推广价值。对肿瘤性疾病,尤其是目前无疫苗的肿瘤性疾病具有一定的意义。


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