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用核酸探针和分子斑点杂交技术检测家禽病毒的核酸

王汉雷  
【摘要】: 在鸡群中同一个体同时存在不同的病毒感染是普遍现象,因此如何能同时检测同一份病料中不同的病毒,对于疫病的鉴别诊断和流行病学研究甚为重要。本研究试图运用分子斑点杂交技术,同时用不同的病毒核酸探针检测同一批病料中的不同病毒,它们分别是禽网状内皮组织增生症病毒(REV)、马立克氏病病毒(MDV)、鸡传染性贫血病毒(CAV)、呼肠孤病毒(ARV)和传染性支气管炎病毒(IBV)。 本实验从泰安某市场采集地方品种鸡的脾脏200份、羽毛囊200份;从莱阳某商品肉鸡场采集脾脏200份、鸡胚100枚,共计700份样品。用REV LTR序列和pol基因标记的核酸探针、MDV PP38基因标记的核酸探针、CAV VP1基因标记的核酸探针、ARVδ3基因标记的核酸探针、IBV N基因标记的核酸探针,分别检测REV、MDV、CAV、ARV和IBV。检测结果如下: 200份地方品种鸡脾脏样品中MDV、CAV、ARV、IBV和REV的检测结果:MDV阳性123份, CAV阳性91份,ARV阳性21份,IBV阳性23份,用REV LTR序列标记的核酸探针检出REV阳性194份,用REV pol基因标记的核酸探针检出REV阳性10份。 200份地方品种鸡脾脏样品中MDV、CAV、ARV、IBV和REV的共感染情况:MDV和REV共感染为7份,MDV和CAV共感染为60份,MDV和ARV共感染为17份,MDV和IBV共感染为10份,CAV和REV共感染为9份,CAV和ARV共感染为14份,CAV和IBV共感染为13份,MDV、CAV和REV的三重感染为6份,MDV、CAV和ARV的三重感染为13份,MDV、CAV和IBV的三重感染为7份(REV的感染数据来自pol基因标记的核酸探针检测结果)。 200份地方品种鸡羽毛囊样品中MDV、CAV、ARV、IBV和REV的检测结果:CAV、ARV和IBV全部阴性, MDV阳性121份,用REV LTR序列和pol基因标记的核酸探针检测REV全部阴性。 200份商品肉鸡脾脏样品中MDV、CAV、ARV、IBV和REV的检测结果:MDV阳性177份, CAV阳性143份, ARV和IBV全部阴性,用REV LTR序列标记的核酸探针检出REV阳性103份,用REV pol基因标记的核酸探针检测REV全部阴性。 200份商品肉鸡脾脏样品中MDV、CAV、ARV、IBV和REV的共感染情况:MDV和CAV的共感染为137份(REV的感染数据来自pol基因标记的核酸探针检测结果)。 100份莱阳鸡胚样品中MDV、CAV、ARV、IBV和REV的检测结果:MDV、ARV和IBV全部阴性,CAV阳性100份,用REV LTR序列和pol基因标记的核酸探针检测REV全部阴性。 在对200份地方品种鸡和200份商品肉鸡的脾脏样品用REV LTR序列和pol基因标记的核酸探针同时检测REV时,两种核酸探针对REV的检出率差异极大:在200份地方品种鸡脾脏样品中,用REV LTR序列标记的核酸探针检出REV阳性194份,而用REV pol基因标记的核酸探针检出REV阳性仅为10份,并且这10份阳性样品包含在上面的194份阳性样品中;在200份商品肉鸡脾脏样品中,用REV LTR序列标记的核酸探针检出REV阳性103份,而用REV pol基因标记的核酸探针检测REV全部阴性。对比结果表明,用REV LTR序列标记的核酸探针,对REV的检测结果大部分是非特异性的,可能是由LTR序列整合到其它病毒或宿主基因组造成的REV假阳性,因此在应用分子斑点杂交技术检测REV时,不能选用REV LTR序列标记探针,而应选择REV的其它基因标记探针,如pol基因,这样很大程度上可以提高REV检测的特异性。 从莱阳某种鸡场送检的疑似鸡传染性贫血的病鸡骨髓、胸腺和法氏囊中提取组织DNA和RNA,斑点杂交检测REV、MDV、CAV、ARV和IBV。检测结果显示:CAV全部阳性,REV、MDV、ARV和IBV全部阴性。以CAV阳性组织DNA为模板,设计一对特异性引物,对病料中的CAV的VP1基因进行了克隆和序列测定。序列测定结果显示其VP1基因全长为1350bp,在与其它CAV参考株VP1基因比较后发现其与America株同源性最高(98.7%)。


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14 张国庆,刘晶,李广兴;鸡传染性支气管炎病毒变异机制的研究进展[J];中国病毒学;2004年02期
15 任文陟,朱维正;马立克氏病病毒的分离和鉴定[J];中国兽医学报;1991年03期
16 刘田生,李继蓉,马文芝,韩光远,朱宏;鸡肾型传染性支气管炎的鸡胚病毒繁毒规律及其血凝特性研究[J];天津农学院学报;1995年04期
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18 阿合买提·买买提,崔琳,刘忠贵,王学东;SPF雏鸡人工感染禽网状内皮组织增殖病病毒后肝组织的超微结构观察[J];黑龙江畜牧兽医;1999年04期
19 魏萍,刘宝全;1日龄雏鸡接种超抗原SEB和MDV后脾淋巴细胞IL-2体外诱生的变化[J];黑龙江畜牧兽医;2000年07期
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