收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

烟草赤星病菌角质酶的纯化、性质及在致病中的作用研究

刘辉  
【摘要】: 烟草赤星病是我国烟草的主要病害之一。上世纪九十年代,曾是烟草生产上的主要叶部病害。为了深入阐明烟草赤星病的发病机理,揭示角质酶在植物病原互作中的作用,从而为病害的防治提供新的理论依据及防治手段,本文针对病原菌致病因子,对烟草赤星病菌Alternaria longipes产生的胞外角质酶进行了发酵条件优化、纯化,并对其在致病中的作用进行了研究。具体结果如下: 1.苹果角质作为诱导物,利用本实验室保存的烟草赤星病菌TBA28,通过正交试验对本菌产生角质酶的发酵条件进行了优化。优化结果确定了最佳培养时间为8 d,最佳培养温度为25℃,最佳pH值为5.5,最佳碳源为蔗糖3%,最佳氮源为干酪素1%,Tween-80为0.3%,产酶能力较优化前提高了约11倍。 2.烟草赤星病菌TBA28经发酵的培养液经80%饱和度的硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析、Sephacryl S-100 HR分子筛层析和Phenyl-Sepharose Fast Flow疏水层析分离纯化到一种角质酶,经SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色后呈单带,分子量约为59.5 kDa。整个过程回收率为3.52%,纯化倍数为26.44。 3.用p-nitrophenyl butyrate为底物测定了反应温度和pH等对角质酶活性的影响。结果表明,该角质酶的反应最适温度为35℃,最适pH值为9.0,温度在20~40℃及pH 4.0~10.0范围内,酶活较为稳定。一些金属离子如Na+、Cu2+和Mn2+可以部分地抑制角质酶活性。Ca2+的浓度为2.5和5 mmol/L时可部分抑制角质酶的活性。而Mg2+和Zn2+的浓度为2.5和5 mmol/L时对酶活没有影响,浓度为10 mmol/L时两者对酶活都有较强的激活作用。 4.利用离体叶片接种方法,筛选出烟草赤星病菌强毒株TBA003,中强毒株TBA002和弱毒株TBA001。将三个分离物进行液体发酵,结果表明,烟草赤星病菌的致病力和产角质酶的活力大小相一致,证明产角质酶能力强的菌株致病力也强,两者呈正相关。在烟草赤星病菌弱毒株TBA001孢子菌悬液中添加纯化的角质酶(孢子浓度为1×106个/mL)并接种烟草叶片,以不加角质酶为对照,根据发病早晚及发病程度证明了角质酶可以促进发病。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 马贵龙,高洁,华致甫;用ELISA法检测烟草种子带有赤星病菌(Alternaria alternata)的研究[J];吉林农业大学学报;1995年03期
2 陶刚,刘杏忠,王革,李世东;木霉几丁质酶对烟草赤星病菌的作用[J];中国生物防治;2004年04期
3 刘辉;刘菲;魏芳芳;梁元存;赵蕾;刘爱新;;烟草赤星病菌(Alternaria longipes)角质酶的纯化和特性(英文)[J];植物病理学报;2009年06期
4 方敦煌;吴祖建;邓云龙;邓建华;林奇英;;烟草赤星病拮抗菌株B75产生抗菌物质的条件[J];中国生物防治;2006年03期
5 王智发,董汉松;培养条件对烟草赤星病菌生长能力的影响[J];山东农业大学学报(自然科学版);1991年03期
6 董汉松;王继伟;王智发;;烟叶煎汁培养基中烟叶用量对烟草赤星病菌生长和产孢能力的影响[J];莱阳农学院学报;1991年01期
7 董汉松;曲建军;王智发;宗树林;杨合同;;烟草赤星病菌致病力变异的研究[J];山东科学;1993年02期
8 张亚;何可佳;罗坤;周叶锋;汪巧;;烟草赤星病研究进展及对策[J];陕西农业科学;2007年02期
9 贾忠建;;异菌脲防治烟草赤星病效果突出[J];农药市场信息;2010年18期
10 董汉松;卜晓东;杨合同;孙立松;杨举田;;培养条件对烟草赤星病菌产孢能力的影响[J];山东科学;1993年02期
11 白建保;宋影;赵秀香;;嘧肽霉素对烟草赤星病菌的抑制作用[J];安徽农业科学;2007年10期
12 唐圣华;万秀清;郭兆奎;颜培强;李丽杰;;烟草赤星病拮抗生防菌BS06-1的筛选[J];安徽农业科学;2008年35期
13 罗坤;罗宽;朱小湘;何昆;黎起秦;黄世文;;烟叶面细菌分离筛选及其对烟草赤星病的拮抗作用[J];湖南农业大学学报(自然科学版);2006年03期
14 李梅云;祝明亮;;烟草赤星病菌对菌核净的抗药性测定[J];西南农业学报;2007年03期
15 董汉松;王智发;;烟草赤星病菌致病力分化与弱毒株抗性诱导作用的研究[J];植物保护学报;1992年01期
16 于莉,李赤,李文健,姚玉霞;烟草赤星病菌生物学特性的研究[J];吉林农业大学学报;1994年02期
17 杨玉范,华致甫,马贵龙;烟草赤星病菌(Alternaria alternata (Fr.)Keisskr)的生长和孢子产生条件及寄主范围的研究[J];吉林农业科学;1994年04期
18 申荣艳,刘学敏,董长军 ,冯喜生;菌核净、代森锰锌及其混剂对烟草赤星病菌毒力测定[J];农药科学与管理;2004年06期
19 ;2004年度《烟草科技》优秀论文评选揭晓[J];烟草科技;2006年04期
20 李锡宏;毕庆文;黎妍妍;许汝冰;王海明;黎根;范敬修;何成恩;;清江流域及环神农架烟区烟草赤星病菌观测与发生规律研究[J];湖北民族学院学报(自然科学版);2010年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 吴敬;陈晟;童星;陈坚;;Thermobifida fusca角质酶基因的鉴定及功能研究[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
2 吴元华;文才艺;朱春玉;赵刚;田秀玲;;农抗TS99对烟草赤星病菌作用的研究[A];第二届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会论文集[C];2003年
3 张乐;王革;高智谋;许峰;;烟草赤星病菌(Alternaria alternata)营养生理研究[A];2005中国植病学会、中国菌物学会北海联合年会论文集[C];2005年
4 王丽珍;肖崇刚;;烟草赤星病两类土壤拮抗细菌的筛选及控病研究[A];科技创新与绿色植保——中国植物保护学会2006学术年会论文集[C];2006年
5 王革;周晓罡;方敦煌;李天飞;;木霉拮抗烟草赤星病菌菌株的筛选及其生防机制[A];中国植病学会西南联合学术年会论文集[C];2000年
6 车志平;王熠;徐晖;;2-(N-取代苯磺酰基吲哚-3-基)-3-N-酰基-5-苯基-1,3,4-(口恶)唑啉类化合物的合成及抑菌活性研究[A];公共植保与绿色防控[C];2010年
7 王嘉渊;周斐红;陈捷;;玉米弯孢霉叶斑病菌Clk1和Clm1基因的克隆与功能分析[A];公共植保与绿色防控[C];2010年
8 王嘉渊;周斐红;陈捷;;玉米弯孢霉叶斑病菌Clk1和Clm1基因的克隆与功能分析[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
9 张成省;李多川;;菌寄生真菌Olpitrichum tenellum与寄主真菌Alternaria alternata识别机制初探[A];中国菌物学会第三届会员代表大会暨全国第六届菌物学学术讨论会论文集[C];2003年
10 石义萍;张克诚;;农抗2-16对作物真菌病害的研究[A];第四届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第三届生物农药研讨会论文集[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前6条
1 张瑶;嗜热子囊菌角质酶—纤维素结合域融合蛋白的构建、定性及其在纺织工业中的应用[D];江南大学;2011年
2 陈晟;嗜热单孢菌角质酶的基因鉴定、高效表达及分子改造[D];江南大学;2009年
3 王平;羊毛表面生物酶改性及机制研究[D];江南大学;2010年
4 阎贺静;酶去除棉织物中非纤维素杂质的作用机制及应用策略[D];江南大学;2009年
5 王小花;Aspergillus oryzae脂肪酶的制备及其用于涤纶改性的研究[D];东华大学;2006年
6 咸洪泉;菌寄生真菌几丁质酶基因的克隆及功能研究[D];山东农业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘辉;烟草赤星病菌角质酶的纯化、性质及在致病中的作用研究[D];山东农业大学;2009年
2 周丽华;角质酶在棉精练中的应用机制研究[D];江南大学;2012年
3 王莉;角质酶在乙醇溶液的性质及其在提取苹果多酚中的应用[D];江南大学;2012年
4 马志远;烟草赤星病菌拮抗芽孢杆菌的筛选、鉴定及应用研究[D];西北农林科技大学;2012年
5 陈伟;棉针织物复合酶精练研究[D];江南大学;2010年
6 于竹青;角质酶在羊毛防缩中的作用研究[D];江南大学;2012年
7 叶若铭;PET和PTT纤维酶法亲水化改性研究[D];江南大学;2013年
8 郭森;重组大肠杆菌产角质酶-CBM发酵优化[D];江南大学;2012年
9 麻莹;桃褐腐菌角质酶的克隆与表达[D];北京化工大学;2012年
10 陶刚;木霉几丁质酶对烟草赤星病菌的作用机制[D];中国农业科学院;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978