收藏本站
收藏 | 论文排版

嗜热子囊菌光孢变种β-葡萄糖苷酶的基因克隆、表达及酶学性质分析

陈卫红  
【摘要】: 到目前为止,已有上百个微生物β-葡萄糖苷酶基因得到克隆,许多微生物来源的β-葡萄糖苷酶基因已获得异源表达。真菌中目前研究得较多的是酵母和木霉属(Trichoderma )、曲霉属(Aspergillus )等霉菌。嗜热真菌研究较少,目前仅在Humicola grisea ,Talaromyces emersonii和Thermoascus aurantiacus(原种)中报道过。由于嗜热真菌表达的热稳定性β-葡萄糖苷酶在高温环境中的稳定性和高活力,因此具有比常温菌β-葡萄糖苷酶无法比拟的应用优势。 嗜热子囊菌光孢变种(Thermoascus aurantiacus var. levisporus)是一种分布广泛、生长上限温度很高的真菌,该菌在乳糖为唯一碳源的培养基中50℃条件下可以产生β-葡萄糖苷酶,应用分子生物学手段,将热稳定β-葡萄糖苷酶基因导入毕赤酵母中高效表达,使β-葡萄糖苷酶在常温和短时间内快速、超量表达,以达到降低能耗和提高经济效益的目的,从而为工业应用奠定基础。 从嗜热子囊菌光孢变种(Thermoascus aurantiacus var. levisporus)RNA中通过RT-PCR克隆出β-葡萄糖苷酶基因bglⅠ和bglⅡ的全长序列。Genbank登录号分别为EU269025和EU263993,将各片段分别插入巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris分泌型表达载体pPIC9K中,获得重组质粒pPIC9K/ bglⅠ和pPIC9K/ bglⅡ,经线性化后用电穿孔法导入毕赤酵母GS115中,在醇氧化酶AOX1基因启动子作用下,分别获得高效表达β-葡萄糖苷酶的毕赤酵母工程菌株。经DEAE-Sepharose阴离子层析分别纯化了重组表达蛋白,SDS-PAGE分别测得该重组蛋白分子量约为120 kDa和118 kDa。经甲醇诱导,工程菌株发酵液中β-葡萄糖苷酶的活力分别为1.2 U/mg和0.23 U/mg,小规模发酵量都达0.45 mg/mL。前者β-葡萄糖苷酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH为5.5。70℃保温30分钟仍保持80%的酶活力,具有较高的热稳定性,在pH3.0~9.0的条件下酸碱耐受性强。后者β-葡萄糖苷酶酶的最适反应pH为5.0,最适反应温度为50℃,热稳定性比前者差。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 陈静;李多川;张玉芹;杜欣可;;嗜热子囊菌光孢变种cbh1基因的cDNA克隆及在毕赤酵母的高效表达[J];农业生物技术学报;2006年03期
2 陈卫红;李多川;;嗜热子囊菌光孢变种β-葡萄糖苷酶的基因克隆、表达及酶学性质分析[J];应用与环境生物学报;2009年04期
3 陈卫红;李多川;;嗜热真菌热稳定性β-葡萄糖苷酶的克隆表达、纯化及酶学性质[J];细胞生物学杂志;2009年04期
4 王冬梅;孟军;李多川;;嗜热子囊菌光孢变种Thermoascus aurantiacus var.levisporus内切β-葡聚糖酶的分离纯化及特性[J];中国生物化学与分子生物学报;2009年10期
5 ;[J];;年期
6 ;[J];;年期
7 ;[J];;年期
8 ;[J];;年期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
11 ;[J];;年期
12 ;[J];;年期
13 ;[J];;年期
14 ;[J];;年期
15 ;[J];;年期
16 ;[J];;年期
17 ;[J];;年期
18 ;[J];;年期
19 ;[J];;年期
20 ;[J];;年期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 张亚波;嗜热真菌热稳定纤维素酶的分子改造[D];山东农业大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前5条
1 陈卫红;嗜热子囊菌光孢变种β-葡萄糖苷酶的基因克隆、表达及酶学性质分析[D];山东农业大学;2009年
2 俄世瑾;嗜热子囊菌光孢变种热稳定超氧化物歧化酶的纯化及基因克隆和表达[D];山东农业大学;2007年
3 于恺;嗜热子囊菌光孢变种几丁质酶基因的克隆和表达[D];山东农业大学;2008年
4 王冬梅;嗜热真菌分类及嗜热子囊菌光孢变种内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶的分离纯化及特性研究[D];山东农业大学;2005年
5 谢晨;嗜热子囊菌光孢变种热稳定蛋白酶的基因克隆和表达及性质研究[D];山东农业大学;2009年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978