收藏本站
收藏 | 论文排版

菠萝蛋白酶提取、分离纯化及稳定性研究

马超  
【摘要】: 本研究测定并比较了菠萝果、皮、茎中蛋白酶活性及蛋白质含量,得到同一品种及成熟度的菠萝果、茎及皮中的酶活差距较大,菠萝茎中酶活性最高,果肉中次之,皮中最低。以菠萝茎为原料,比较了高岭土吸附法,超滤浓缩有机溶剂沉淀法及纳米二氧化钛吸附法对茎菠萝蛋白酶纯化效果的影响。对纳米二氧化钛吸附法制备的茎菠萝蛋白酶采用离子交换层析法进一步纯化,并进行稳定性研究。主要结果和结论如下: 1.不同方法纯化效果比较高岭土吸附法所得菠萝蛋白酶回收率为64.3%,纯化倍数2.63倍;超滤浓缩有机溶剂沉淀法所得酶回收率78.4%,纯化倍数1.34倍;纳米二氧化钛吸附法所得酶回收率64.7%,纯化倍数达5.29倍。通过三种工艺及纯化效果比较得:高岭土吸附法生产工艺和操作较复杂,原材料消耗多,所需设备也多,纯化倍数不高;超滤浓缩有机溶剂沉淀法截留液中与菠萝蛋白酶分子量相近的杂蛋白无法除去,导致所得酶制品比活力较低。而纳米二氧化钛吸附生产工艺和操作简单,原材料消耗少,并能减少与菠萝蛋白酶分子量相近杂蛋白对后续超滤步骤的影响,纯化效果优于前两种方法。 2.纳米二氧化钛吸附法工艺优化在纳米二氧化钛吸附工艺优化过程中,以纳米二氧化钛用量,pH,温度,吸附时间等为因素,在单因素实验的基础上进行正交试验,得到纳米二氧化钛的最佳吸附条件为:纳米TiO2用量为吸附液的3.5%,吸附液pH为4.7,吸附温度15℃,吸附时间25min,酶吸附率达98.2%。采用pH6.0,0.4mol/L的柠檬酸缓冲液作为洗脱液洗脱30min,酶回收率达79.3%。对洗脱液进行超滤,利用40KD和20KD的超滤膜两级截留超滤可有效的浓缩菠萝蛋白酶,去除杂蛋白,操作过程中,压力差保持在2.5×105~3×105 Pa,酶回收率64.7%,纯化倍数5.29倍。 3.离子交换层析进一步分离纯化用离子交换层析法对纳米二氧化钛吸附法所得蛋白酶进一步纯化。采用美国伯乐公司离子交换树脂158-0030,以pH6.0的0.01mol/L Tris-磷酸盐溶液为初始缓冲液,以0.1~1.5 mol/L NaCl溶液进行线性洗脱,得到蛋白酶比活力6.4×103 U/mg.Pr,纯化倍数提高到13.73倍。 4.菠萝蛋白酶稳定性研究对纳米二氧化钛吸附法得菠萝蛋白酶进行保存稳定性实验,结果表明:菠萝蛋白酶在pH5.0~6.5时,酶活力较稳定,pH6.0时酶活力稳定性最好;菠萝蛋白酶在贮存过程中光对其稳定性的影响显著,室温贮存10天后,避光条件下酶活力保留率比室内自然光照条件下高13.1%;随着贮存温度(T)的升高,菠萝蛋白酶活力保留率(S)明显下降,呈线性关系,S=119.5-1.411T。菠萝蛋白酶在70℃以下加热活力下降幅度较小,超过70℃,酶活力急剧下降;由半胱氨酸(0.005%)、EDTA(0.05%)组成的复合稳定剂可使菠萝蛋白酶半衰期达240天。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 李兴,林哲甫;某些因素对菠萝中菠萝蛋白酶热稳定性的影响[J];药物生物技术;2001年06期
2 李兴,林哲甫;多元醇和糖类对菠萝蛋白酶热稳定性的影响[J];中国生物制品学杂志;2001年04期
3 颜青,陈瑞川,郭大勇,张铮,杨善民;菠萝蛋白酶诱导K562细胞分化及其对P53基因表达的影响[J];厦门大学学报(自然科学版);1999年01期
4 章佩芬,郭勇,罗焕敏;菠萝蛋白酶的研究与应用进展[J];华西药学杂志;2002年02期
5 章佩芬,郭勇;菠萝蛋白酶的保存稳定性研究[J];药物生物技术;2002年03期
6 赵武玲,吴玮,李藏铭,王秀蛟;果实菠萝蛋白酶的动力学研究[J];中国农业大学学报;1999年01期
7 潘江球,刘坚,李思东,许逵;Polyacrylamide对菠萝蛋白酶活力的稳定作用[J];热带作物学报;2002年04期
8 敏涛;;色黄味香是菠萝[J];科学世界;1995年06期
9 李乃成;贺艳丽;凌沛学;张天民;;菠萝蛋白酶[J];食品与药品;2007年01期
10 果子;;菠萝的三种麻烦[J];科普天地(资讯版);2009年02期
11 李明春;蔡振元;陈创业;;菠萝蛋白酶的基本性质研究[J];华侨大学学报(自然科学版);1992年01期
12 王若鹏;林海;胡达吉;;单宁法提取菠萝蛋白酶后菠萝废汁的回收利用的研究[J];海南大学学报(自然科学版);1986年04期
13 林韶湘,黄卓烈,李明启,陈永泉;菠萝各器官蛋白酶的提取与保活[J];植物资源与环境学报;1994年02期
14 蒋荣;单良;王兴国;;3-氨基丙基三乙氧基硅烷改性凹凸棒土固定化菠萝蛋白酶工艺研究[J];安徽农业科学;2008年25期
15 易元龙;李媚;谢涛;蓝丽红;廖安平;;菠萝果浸提液中菠萝蛋白酶的稳定性研究[J];广西民族大学学报(自然科学版);2008年04期
16 杨筱静;;菠萝蛋白酶研究与应用[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年09期
17 谭玉龙;刘晨光;刘成圣;于乐军;;亚油酸修饰羧甲基壳聚糖纳米粒固定化菠萝蛋白酶的研究[J];海洋科学集刊;2009年00期
18 王晓敏;刘智均;胡秀沂;黄惠华;;Ca~(2+)和聚乙二醇对菠萝蛋白酶活性和热稳定性的影响[J];现代食品科技;2008年09期
19 张琛;张宽朝;章琛;缪伟;;海藻酸钠包埋法制备固定化菠萝蛋白酶[J];生物加工过程;2009年06期
20 欧英杰;;菠萝蛋白酶酶活力影响因素及测定酶活力方法的研究进展[J];广东化工;2010年05期
中国重要会议论文全文数据库 前7条
1 董瑞兰;黄志坚;;菠萝蛋白酶的药理作用最新进展及在畜牧业中的应用[A];福建省畜牧兽医学会2009年学术年会论文集[C];2009年
2 董瑞兰;黄志坚;张潮华;陈志昌;江和基;;菠萝蛋白酶体外防治K88+ETEC腹泻机理的初步研究[A];中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会论文集(下册)[C];2010年
3 孙佳益;华玉萍;王锡昌;卢瑛;;酶对虾类主要过敏原原肌球蛋白的消减作用研究[A];中国食品科学技术学会第八届年会暨第六届东西方食品业高层论坛论文摘要集[C];2011年
4 陈成章;;铜与免疫功能[A];中国毒理学会第三届全国学术会议论文(摘要)集[C];2001年
5 马静;;试论李竞教授关于酶学清创理论在疮疡清创中的应用[A];第十五次全国中西医结合疡科学术交流会论文汇编[C];2011年
6 曾凡坤;罗晓妙;;酶法处理提高榨菜品质研究[A];管产学研助推食品安全重庆高峰论坛——2011年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨全国食品科学与工程博士生学术论坛论文集[C];2011年
7 马静;张朝晖;;蛋白酶在疮疡“去腐”中应用的浅析[A];中华中医药学会周围血管病分会第四届学术大会暨中华中医药学会周围血管病分会25年会庆论文集[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前6条
1 胡维;菠萝蛋白酶对高速破片伤清创作用的实验研究[D];第三军医大学;2011年
2 何铁剑;菠萝组织与细胞培养及其诱导产酶研究[D];华南理工大学;1994年
3 徐军;富苯丙氨酸碱性短肽的发现及其对蛋白质等电点和免疫交叉反应的影响[D];华南理工大学;2010年
4 闻真珍;硫矿硫化叶菌小热激蛋白SsHSP14.1的功能特性研究[D];华南理工大学;2010年
5 赵国琰;深海适冷蛋白酶MCP-01对胶原蛋白的催化机制及其在肉类嫩化中的应用基础研究[D];山东大学;2011年
6 胡秀沂;改性菠萝皮渣金属吸附剂及水凝胶的制备与表征[D];华南理工大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 董瑞兰;菠萝蛋白酶的分离纯化及部分应用性质的研究[D];福建农林大学;2010年
2 梁宏宇;菠萝蛋白酶提取方法的研究[D];广西民族大学;2012年
3 张兆琴;动态高压微射流技术对胰蛋白酶和菠萝蛋白酶性质和构象变化的影响[D];南昌大学;2010年
4 潘江球;影响菠萝蛋白酶活力主要因素的研究[D];华南热带农业大学;2003年
5 马超;菠萝蛋白酶提取、分离纯化及稳定性研究[D];山东农业大学;2009年
6 黄丽;利用发酵法和酶法综合技术改进玉米淀粉加工工艺的研究[D];吉林大学;2007年
7 凌秀梅;利用啤酒废酵母制备多肽的研究[D];贵州大学;2007年
8 周弛;量子点—菠萝蛋白酶与纤维蛋白原相互作用和食品中苏丹红检测新方法的研究[D];吉林大学;2007年
9 王晓玲;茶多酚对植物巯基蛋白活性的影响研究[D];江南大学;2007年
10 史文颖;类水滑石作为菠萝蛋白酶的分子容器研究及水滑石层间分子取向研究[D];北京化工大学;2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 小芳;菠萝蛋白酶分解蛋白抗炎症[N];医药经济报;2003年
2 ;水果食用不当易致病[N];卫生与生活报;2003年
3 张小明;植物化学物质保健食品的未来[N];中国中医药报;2005年
4 早启;自制果汁 治病养生[N];大众卫生报;2002年
5 黄爱群;吃菠萝防过敏[N];中国医药报;2001年
6 叶国雄;菠萝味美须慎食[N];保健时报;2004年
7 罗玉菊;孩子吃菠萝当心过敏[N];大众卫生报;2004年
8 殷春英;酸酸甜甜水果 苦苦涩涩疾病[N];健康报;2002年
9 健康时报特约记者 沈艳;菠萝煮着吃不易致过敏[N];健康时报;2009年
10 冯敏 唐春红;生姜蛋白酶的研究概述[N];中国食品质量报;2009年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978