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绿原酸对K562/ADM细胞多药耐药的影响及机制研究

任秀敏  
【摘要】:目的:本实验通过检测绿原酸(chlorogenicacid,CHA)对人慢性髓系白血病细胞阿霉素耐药株K562/ADM的逆转耐药倍数、细胞内阿霉素及罗丹明123的荧光强度及相关蛋白表达含量的影响,探究其对K562/ADM细胞多药耐药的影响及分子机制,为临床逆转白血病多药耐药提供实验依据。方法:MTT法检测CHA对K562/ADM细胞的无毒浓度(IC5和IC10)及无毒浓度逆转耐药倍数。CHAIC5和IC10处理K562/ADM细胞,FCM检测胞内 ADM MFIJ 及罗丹明-123(Rhodamine-123,Rho-123)MFI;Western blotting 检测 p-Akt(Akt phosphrylation,Akt Ser473)、t-Akt(total-Akt)、P-gp 以及MRP1蛋白表达量的变化。结果:2μM和4μM CHA对K562/ADM细胞的生长抑制率分别为(4.82±0.37)%、(7.62±0.67)%,取 2μM 和 4μM CHA 作为无毒浓度,分为CHAIC5、IC10 组,逆转耐药倍数分别为 1.65 和 2.61。CHAIC5 组、IC10组胞内 ADM MFI 和 Rho-123 MFI 分别为 223±26 和 326±35、713±25 和 929±37,均显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。CHAIC5组、CHAIC10组K562/ADM细胞p-Akt、P-gp、MRP1蛋白的相对表达量分别为(37.41±0.575)%和(32.41 ±0.575)%、(59.33±0.658)%和(51.33±0.452)%、(77.34±1.143)%和(66.12±1.102)%,均明显低于对照组,差异有统计学意义(P0.05);而t-Akt蛋白的相对表达量与对照组相比,差异无统计学意义。结论:CHA通过降低P-gp、MRP1的表达水平抑制P-gp和MRP1的转运功能,提高胞内药物蓄积浓度,从而逆转K562/ADM的多药耐药,揭示作用机制是通过阻断PI3K/Akt信号通路而实现的。


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