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祛瘀解毒法对子宫内膜异位症患者及大鼠卵丘颗粒细胞凋亡与分泌影响的研究

刘海萍  
【摘要】: 观察祛瘀解毒法结合IVF-ET治疗血瘀蕴毒型子宫内膜异位症不孕的疗效,并观察其对卵丘颗粒细胞凋亡及分泌功能的影响,探讨其作用机理,试图开辟中西医结合治疗EM不孕的新思路,为临床有效治疗该病提供依据。 方法: 临床研究:将在行IVF治疗前经腹腔镜、剖腹探查或超声诊断为EM患者82例随机分为治疗组42例和观察组40例。治疗组42例口服祛瘀解毒颗粒3个月后行IVF-ET长方案治疗;观察组40例EM患者直接行IVF-ET长方案治疗。观察治疗前后血瘀蕴毒证候积分变化、临床妊娠率、血清和卵泡液E2、P含量、卵丘颗粒细胞调亡率及颗粒细胞内Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。同时行卵丘颗粒细胞体外培养48h后观察E_2、P的分泌情况以了解卵丘颗粒细胞的分泌功能。 实验研究一:40例EM模型大鼠随机分为试验组、观察组各20例,另取20只大鼠只牵拉子宫作为空白对照组。试验组每天给予祛瘀解毒颗粒溶于2ml生理盐水灌胃,观察组和空白组均给予2ml生理盐水,连续灌胃3周。末次给药后24h各组大鼠均给予人绝经后促性腺激素(HMG)50IU腹腔注射,48h后给予人绒毛膜促性腺激素(HCG)100IU/100g,14~16h后处死大鼠收集卵细胞及颗粒细胞团,观察优质卵细胞数目及优质卵细胞率,采用PI法检测卵丘颗粒细胞调亡率,观察颗粒细胞内凋亡相关蛋白Bax与Bcl-2的表达情况。 实验研究二:分别将三组大鼠卵丘颗粒细胞悬液用0.4%的台盼蓝染色,血细胞计数板计数活细胞数,细胞存活数大于90%后入选。用M199培养液(含20%小牛血清、100 U/ml青霉素和100 mg/ml链霉素)将入选颗粒细胞悬液调整为3×10~6/ml的单细胞悬液备用。将颗粒细胞悬液按3×10~6/孔,随机种入事先用0.05%L-多聚赖氨酸涂布的多孔培养板内,放入充5%CO2和95%空气的37℃恒温孵箱中预培养24h。倒置显微镜下观察颗粒细胞生长情况。细胞贴壁后换入含2%小牛血清、100U/ml青霉素和100mg/ml链霉素的M199培养液,继续培养24h、48h后收集培养液,-20℃冻存,测E2、P。 结果: 1.治疗组患者血瘀蕴毒证候能够得到有效改善,提高患者临床妊娠率,降低EMAb的阳性率及CA_(125)水平,提高患者血清及卵泡液E_2、P的含量,降低卵丘颗粒细胞Bax蛋白的表达、提高卵丘颗粒细胞Bcl-2蛋白的表达,使Bcl-2/Bax比值升高,降低卵丘颗粒细胞凋亡率,提高优质卵率、受精率、优质胚胎率,从而提高患者临床妊娠率,效果明显优于观察组(P<0.05)。 2.试验组大鼠优质卵细胞数目、优质卵细胞率明显高于观察组(P<0.05),卵丘颗粒细胞凋亡率和Bax蛋白明显低于观察组,Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax比值升高(P<0.05)。 3.试验组大鼠卵丘颗粒细胞在体外培养48h、72h后分泌E_2、P含量高于观察组(P<0.05)。 结论:祛瘀解毒颗粒可以改善血瘀蕴毒症候,提高子宫内膜异位症不孕患者临床妊娠率,是治疗血瘀蕴毒型子宫内膜异位症的有效药物。推测其作用机理可能与两方面有关:一是可能与降低卵丘颗粒细胞Bax蛋白的表达、提高卵丘颗粒细胞Bcl-2蛋白的表达、使Bcl-2/Bax比值升高,从而降低颗粒细胞凋亡率,提高优质卵率、受精率、优质胚胎率有关;二是可能通过提高颗粒细胞分泌功能以改善内分泌状态有关。


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