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半夏白术天麻汤用半仿生—生物酶法提取的系统研究

王淑玲  
【摘要】: 目的:以半夏白术天麻汤为例,探讨中药复方药效物质用“半仿生-生物酶法(SBEE法)”提取的基本模式。 方法:①用正交设计法,在方药饮片规格、酶预处理用水量、方药提取用水量、滤过、浓缩等条件相同的前提下,以天麻素、甘草次酸、分子量≤1000Da提取物、HPLC积分总面积、总多糖、干浸膏等为综合评判指标,优选SBEE法提取的工艺条件;②将方药按照君臣佐使的原则排列组合成15组,以上述综合指标,优选用SBEE法提取方药较佳组合方式;③采用方药较佳组合方式,用均匀设计法,以上述综合指标,优选出SBE法提取工艺条件;④用比例分割法,以上述综合指标,优选出方药AE法(醇提法)较佳醇提浓度;⑤对方药4种方法提取液(SBEE法、SBE法、WE法(水提法)、AE法)作成分、HPLC指纹图谱、兔含药血清HPLC和紫外光谱指纹图谱比较;⑥方药4种方法提取液(SBEE法、SBE法、WE法、AE法)对高血压痰湿壅盛型大鼠、痰湿中阻型内耳眩晕症(梅尼尔氏综合症)大小鼠及小鼠最大耐受量影响的研究比较。综合分析,半夏白术天麻汤是否以SBEE法提取为佳。 结果:①优选出半夏白术天麻汤用SBEE法提取的工艺条件为:将方药先用2%酶Ⅰ(以饮片质量计)预处理12h;方药提取3煎,第一煎加入0.5%酶Ⅲ(以提取用水体积计),第三煎加入1%酶Ⅳ(以提取用水体积计);3煎水的pH值依次为:2.0、6.5、9.0,提取时间依次为:60min、30min、30min,提取温度为:61℃±1℃;②优选出方药提取较佳组合为:半夏与天麻、茯苓与橘红、白术与甘草分别提取,再将3种提取液合并;③优选出SBE法的工艺条件为:3煎用水的pH值依次为4.0、6.5、8.0,煎煮时间依次为120min、90min、90min;④优选出AE法较佳乙醇浓度为30%;⑤方药4种方法提取液的成分综合评价指标Y值的大小顺序为:Y_(SBEE)>Y_(SBE)>Y_(WE)>Y_(AE);⑥4种方法提取液HPLC指纹图谱相对应的特征峰积分面积,以SBEE液总面积最大。以SBEE法提取液的HPLC为标准图谱,不同提取液相关系数和夹角余弦值的大小顺序是SBE>WE>AE,欧氏距离的大小顺序是AE>WE>SBE;⑦SBEE液给药2h后兔含药血清指纹图谱的综合Y值最大;4种方法提取液给药后2h含药血清以SBEE液的综合Y值最大;⑧4种方法提取液对高血压痰湿壅盛型大鼠模型症状、体重增长、SBP(收缩压)、DBP(舒张压)、胰岛素敏感指数(ISI)、血脂的改善,以SBEE液最佳,改善次序为SBEE>SBE>WE>AE;⑨对痰湿中阻型内耳眩晕症(梅尼尔氏综合症)实验动物的影响,4种提取液均能减少旋转刺激性大鼠对高岭土的食用量,SBEE作用最强,强弱次序为SBEE>SBE>WE>AE。4种方法提取液均能缩短旋转刺激性小鼠在棒上站稳最短时间,SBEE液作用最强,强弱次序为SBEE>SBE>WE>AE。4种方法提取液主要药效强弱次序为SBEE>SBE>WE>AE;⑩小鼠最大耐受量的试验动物无一死亡,表明各种提取液基本无毒,安全可靠。 结论:本研究利用多指标综合评判,首先优选出半夏白术天麻汤方药SBEE法提取的工艺条件和方药较佳组合方式;同时优选出SBE法和AE法的工艺参数。然后比较4种提取液(SBEE法、SBE法、WE法、AE法)的多指标成分综合评判Y值、HPLC指纹图谱、兔含药血清指纹图谱、主要药效学指标和最大耐受性。结果以SBEE液为佳,SBE次之,优于其他三种提取液。初步表明,以半夏白术天麻汤为例,将生物酶引入SBE法,提高仿生化程度,更有利于药效物质的浸提,增加提取率,提高药效。本研究初步建立了中药复方用SBEE法系统研究的基本模式,为SBE法进一步仿生化研究提供了初步的的借鉴。同时,再一次验证了SBE法理论的科学性、先进性和实用性。


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