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小鼠卵巢Evi-1表达水平与卵泡发育的相关性研究

李扬  
【摘要】:Evi-1(the ecotropic viral integration site-1)基因作为一个逆转录病毒常见的插入位点,首先是在由逆转录病毒诱发的急性髓系白血病小鼠(AKXD)中被发现的。正常情况下,Evi-1基因在人的造血细胞上不表达,但在逆转录病毒诱导的伴染色体3q26异常的人类髓系白血病细胞上过度表达,3q26染色体也是Evi-1定位的染色体。研究发现Evi-1是转化生长因子β(TGF-β)超家族信号通路中重要的调节因子,在TGF-β信号通路中发挥抑制作用。缺失Evi-1基因的小鼠将在胚胎发育的前几周因多种生理缺陷而死亡。多项研究证实Evi-1在小鼠的胚胎组织和成体组织中均有表达。但是Evi-1在卵巢中的研究甚少。TGF-β信号通路在卵泡发育过程中的作用以及Evi-1在其通路中的抑制作用使得我们推测Evi-1在卵泡的发育过程中可能发挥某些功能。因此,本实验的目的在于定位Evi-1在卵巢中的位置并进一步研究其在卵泡发育过程中的生物学功能。 本实验结果显示: 1. Evi-1蛋白定位于卵母细胞质中,在颗粒细胞,膜细胞,以及卵母细胞核中均未见其表达。 2.早期卵泡发育组,Evi-1呈现出高表达的状态。在出生后1天和4天的小鼠卵巢中,Evi-1的表达量最高。随着卵泡的发育,Evi-1在卵母细胞质中的表达量逐渐降低,在出生10天和16天的卵巢中呈现出一个中间级的表达量水平。最后在23天的小鼠卵巢中表现出一个最低量的表达。由此可见,随着卵泡的发育,Evi-1的表达表现出一个逐级下降的趋势。 3.促性腺激素处理组,Evi-1依旧表达与卵母细胞质中,并且随着卵泡的发育其表达水平继续呈现下降的趋势。在大的有腔卵泡中,Evi-1的表达已经非常低,但是在一些小卵泡中表现出高表达状态,大小卵泡的对比明显。在PMSG24小时处理组中,大的有腔卵泡中可以看到其表达,但是在HCG4小时和HCG11小时的处理组中,大的有腔卵泡中Evi-1的表达已经非常非常弱了。最后,在黄体中未见Evi-1的表达。 4.发情周期检测组,Evi-1主要表达于小卵泡的卵母细胞质中。其中,发现Evi-1在间情期和发情期中的表达量要略高于发情前期和发情后期,提示Evi-1的表达可能受到激素的调节。 5.排卵相关基因的检测,real-time PCR检测Evi-1 mRNA水平和排卵相关基因(Ptgs2, Tnfaip6, Has2, Cd44, C1qbp)mRNA的水平。在HCG处理4小时后检测发现,Evi-1 mRNA的表达水平下调而上述排卵相关基因的水平却上调。 总结:Evi-1在卵泡发育的早期过程中呈现高表达状态,随着卵泡的发育表达水平逐渐降低。这种特定的表达方式表明Evi-1分子在早期的卵泡发育过程中可能发挥一定的作用。


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