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亲水色谱质谱联用技术在天然产物中的分析方法和应用研究

东莎莎  
【摘要】:天然产物的组成成分复杂,极性各异,含量差异大。其中,强极性成分是天然产物中一类重要组分,表现出多种活性特征。强极性活性成分的分析表征方法研究对天然产物的开发和质量控制具有重要意义。目前,色谱-质谱(LC-MS)联用技术在天然产物的分析和质量控制方面发挥了重要作用,但传统的反相液相色谱法(RP-HPLC)对强极性成分保留能力不强,分离度较差,其在质量控制中表现出明显的不足。亲水色谱法(HILIC)是二十世纪九十年代提出的一种新的色谱分离技术,其主要特点是使用极性固定相,流动相是水(强洗脱溶剂)和有机溶剂,特别适用于强极性成分的分离,流动相中含有高比例的乙腈,与电喷雾质谱联用(ESI-MS)离子化效率较高。HILIC目前广泛应用于蛋白组学、代谢组学、环境科学等前沿领域,用于食品药品质量控制方面的文章较少,而有关亲水色谱-电喷雾质谱联用技术(HILIC-ESI/MS)在天然产物中强极性成分的分析和质量控制方面的研究较少。基于此,本研究对HILIC-ESI/MS在几种药食两用的天然产物(如:桑叶、大枣、丹参)中强极性活性成分的分析表征和质量控制方法方面的研究进行了初步探索,主要在以下几方面进行了研究: 首先,以桑叶为样品,采用超声波辅助提取,HILIC分析桑叶中黄酮类成分的含量,建立10批山东产地的桑叶的指纹图谱,有17个共有峰,4个峰特征峰,电喷雾飞行时间质谱分析结合文献定性4种成分,相似度分析表明10种桑叶相似度均在0.900以上,而另外2种不同产地的桑叶相似度在0.900以下,因此,实验建立的桑叶HILIC指纹图谱法可用于不同产区桑叶样品的初步鉴别。 其次,以5个品种的大枣为样品,超声提取,HILIC法测定大枣中核苷酸含量,使用聚类分析建立18批次大枣样品的指纹图谱。结果表明:采用超声提取法,大枣中核苷类成分提取率较高;HILIC比目前使用最广的高效液相色谱(HPLC)灵敏度高;采用ESI-TOF/MS技术结合标准对照品可以对核苷类成分进行准确鉴别,得到的大枣样品中9种核苷酸含量比以往文献报道中的高;枣中核苷酸种类很多,但含量差异很大,能同时测量多种核苷酸含量的方法或研究鲜见报道,本实验建立的方法能满足大枣核苷酸种类多、含量差异大的要求,同时测定其中9种核苷酸的含量;采用基于HILIC法的核苷指纹结合聚类分析可以实现不同品种大枣的初步区分。 最后,采用超高压提取法,建立了山东产区丹参酚酸类成分的HILIC特征指纹图谱方法,通过与标准品的对比,定量了丹参中9种酚酸类成分。研究表明:超高压提取丹参酚酸类成分提取率优于超声、加热回流的提取效果;本实验建立的方法能满足丹参酚酸类成分含量差异大要求,能同时准确鉴定丹参7种酚酸类成分;采用本研究发展的丹参酚酸类成分亲水色谱特征指纹图谱结合相似度分析可以用于丹参产地的初步区分。 本研究对天然产物中强极性成分的提取分析和质量控制研究提供了方法和技术上的支持,并且进一步拓展了HILIC-ESI/MS在天然产物分析中的应用范围。


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